[发明专利]一种固态上转换荧光探针及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种固态上转换荧光探针及其制备方法与应用。固态上转换荧光探针的制备方法包括以下步骤：a.制备蛋白石光子晶体；b.制备上转换纳米粒子；c.上转换纳米粒子功能化修饰；d.上转换纳米粒子与蛋白石光子晶体复合，制成固态上转换荧光探针。本发明还公开了上述方法制备的固态上转换荧光探针及使用该探针检测肿瘤标记物的方法。本发明利用光子晶体效应对发光的调控，增强上转换发光强度，提高检测的灵敏度，降低检测下限；本发明提供的荧光探针是基于近红外光源激发的，所以能够很好地克服背景荧光干扰；本发明提供的荧光探针是固态探针，能够避免液态荧光探针中溶液浓度及分散性等因素对检测造成的干扰。

主权项

一种固态上转换荧光探针的制备方法，包括以下步骤：a.制备蛋白石光子晶体：将微球分散在水中，制成浑浊液，将玻璃基板垂直插入该浑浊液中，28‑40℃恒温20‑30小时，制成蛋白石光子晶体，将所述蛋白石光子晶体放置到100‑120℃环境中40‑60分钟增加其机械强度；b.制备上转换纳米粒子：将聚醚酰亚胺、NaCl及稀土硝酸盐放入乙二醇中进行充分搅拌，制成溶液一，将NH4F和乙二醇加入另一容器中进行充分搅拌，制成溶液二，将溶液二滴加至溶液一中，继续搅拌至溶液澄清后装入反应釜，180‑240℃反应2‑8小时，待反应釜自然降温至室温后，离心收集，并用乙醇和去离子水离心清洗，得到上转换纳米粒子；c.上转换纳米粒子功能化修饰：将上转换纳米粒子分散在PBS缓冲液中，加入上转换纳米粒子质量10％‑15％的活化生物素，在室温下搅拌4‑8小时，生物素通过酰胺键共价连接到上转换纳米粒子上，产物经过离心收集并用PBS溶液清洗去除未连接的生物素，向溶液中加入亲和素修饰的肿瘤标记物捕获抗体；d.上转换纳米粒子与蛋白石光子晶体复合：将步骤c所得的修饰好的上转换纳米粒子分散在PBS缓冲液中，制成修饰上转换纳米粒子分散液，将步骤a所得的长有蛋白石光子晶体的玻璃基板用PDMS封片后插入到所述修饰上转换纳米粒子分散液中，20‑35℃恒温至修饰上转换纳米粒子分散液的溶剂全部挥发，制成固态上转换荧光探针。