[发明专利]一种用于早期肺癌无创筛查的组合物及其应用

摘要

本发明公开了一种用于早期肺癌无创筛查的组合物及其应用,组合物包括SHOX2基因的3对甲基化特异性引物探针、PTGER4基因的3对甲基化特异性引物及1对内参基因引物探针，还包括SHOX2基因的3个非甲基化目的基因对应的MGB探针和PTGER4基因的3个非甲基化目的基因对应的MGB探针。用于早期肺癌无创筛查的甲基化检测试剂盒包括该组合物,通过检测肺癌高风险人群血液中游离DNA的SHOX2基因和PTGER4基因启动区、基因编码及非编码区域中的3个目标位点甲基化情况来筛查早期肺癌患者，并辅助肺癌的早期诊断。对于甲基化特异性的PCR(Methylation‑specific PCR，MSP)检测方法，操作简便、耗时较短，结果易于分析。

主权项

1.一种用于早期肺癌无创筛查的组合物，其特征在于，所述组合物包括分别用于检测待检样品中与早期肺癌相关的甲基化区域的3个SHOX2基因的核酸序列、3个PTGER4基因的核酸序列和1个内参基因的核酸序列，其中，针对SHOX2基因的3对甲基化特异性引物、针对PTGER4基因的3对甲基化特异性引物和1对内参基因引物的序列如下：SHOX2基因1正向引物F：SEQ ID NO.1，SHOX2基因1反向引物R：SEQ ID NO.2；SHOX2基因2正向引物F：SEQ ID NO.3，SHOX2基因2反向引物R：SEQ ID NO.4；SHOX2基因3正向引物F：SEQ ID NO.5，SHOX2基因3反向引物R：SEQ ID NO.6；PTGER4基因1正向引物F：SEQ ID NO.7，PTGER4基因1反向引物R：SEQ ID NO.8；PTGER4基因2正向引物F：SEQ ID NO.9，PTGER4基因2反向引物R：SEQ ID NO.10；PTGER4基因3正向引物F：SEQ ID NO.11，PTGER4基因3反向引物R：SEQ ID NO.12；内参基因(β‑actin)正向引物F：SEQ ID NO.13，内参基因(β‑actin)反向引物R：SEQ ID NO.14；所述组合物还包括SHOX2基因的3个甲基化位点对应的MGB探针、PTGER4基因的3个甲基化位点对应的MGB探针以及内参基因对应的MGB探针，具体核苷酸序列如下：SHOX2基因1探针：SEQ ID NO.15；SHOX2基因2探针：SEQ ID NO.16；SHOX2基因3探针：SEQ ID NO.17；PTGER4基因1探针：SEQ ID NO.18；PTGER4基因2探针：SEQ ID NO.19；PTGER4基因3探针：SEQ ID NO.20；内参基因(β‑actin)探针：SEQ ID NO.21；其中探针序列的5’端标记荧光报告基团，3’端标记淬灭基团；所述组合物还包括SHOX2基因的3个非甲基化目的基因对应的MGB探针和PTGER4基因的3个非甲基化目的基因对应的MGB探针，具体核苷酸序列如下：SHOX2基因1简并封闭引物：SEQ ID NO.22；SHOX2基因2简并封闭引物：SEQ ID NO.23；SHOX2基因3简并封闭引物：SEQ ID NO.24；PTGER4基因1简并封闭引物：SEQ ID NO.25；PTGER4基因2简并封闭引物：SEQ ID NO.26；PTGER4基因3简并封闭引物：SEQ ID NO.27。