[发明专利]一种松露菌代谢产物的制备方法

摘要

本发明公开的是一种松露菌代谢产物的制备方法，属于真菌类生物技术领域，包括斜面培养、摇瓶培养、种子罐培养、大罐培养、浓缩提取五大步骤。最后通过药理实验数据证明本发明公开的培育方法，投入的成本低，生产周期短，扩大生产率高，代谢产物稳定的特点。经松露菌发酵代谢产物对更年期动物的内分泌失调、生殖系统和行为学等方面进行药理活性及有效剂量进行测试证明松露菌发酵产物对更年期综合症有药理活性，疗效显著。

主权项

一种松露菌代谢产物的制备方法，其特征是：包括以下步骤，并且以下步骤顺次进行，步骤一、斜面培养将从野生松露菌中分离出的松露菌菌株，以10％的接种量接种入PH值为6～6.5的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中进行斜面培养，培养温度为22℃～28℃，培养时间为8天～10天；步骤二、液体深层发酵种子培养将所述步骤一中培养后的松露菌菌株接种至摇瓶，斜面与摇瓶的接种量比为1：2，摇瓶内置液体培养基，进行液体深层发酵种子培养，培养温度为22℃～28℃，培养时间5天～7天；步骤三、种子罐培养向10L清洁无菌的种子罐内装入占罐内容积50％的培养基，按照1kg/㎝2～1.5kg/㎝2的高压蒸汽灭菌0.3小时～0.5小时，其中蒸汽的温度为120℃～125℃，冷却至室温后，无菌操作接入所述步骤二中培养后的菌种，进行种子罐发酵培养，培养温度为22℃～28℃，培养时间8天～10天；步骤四、大发酵罐扩繁培养向100L清洁无菌的种子罐内装入占罐内容积50％的培养基，按照1kg/㎝2～1.5kg/㎝2的高压蒸汽灭菌0.3小时～0.5小时，其中蒸汽的温度为120℃～125℃，冷却至室温后备用，将所述步骤三培养好的菌种无菌操作移入大发酵罐，进行大罐培养，培养温度为22℃～28℃，培养时间8天～10天，获得大罐发酵产物；步骤五、发酵产物提取浓缩将所述步骤四中获得的大罐发酵产物用离心机分离，得到滤液Ⅰ及菌丝Ⅰ，将菌丝Ⅰ与清水按体积比1：4的比例混合静止0.3小时后水提0.7小时，用200目滤布过滤得到滤液Ⅱ，将滤液Ⅰ与滤液Ⅱ混合并放入减压浓缩装置，设置减压浓缩装置的压强参数为60KPa～70KPa，加热温度为50℃～60℃，浓缩至溶液含水量为30％，得到松露菌发酵产物浓缩液。