[发明专利]多基因捕获测序的单链探针制备方法有效
| 申请号： | 201710397693.6 | 申请日： | 2017-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN107236727B | 公开（公告）日： | 2021-09-14 |
| 发明（设计）人： | 王弢;官民晓;巴兆粉;陆亚红 | 申请（专利权）人： | 江苏为真生物医药技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6811 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市苏州工*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种多基因捕获测序的单链探针制备方法，该方法包括如下步骤：1、芯片合成，2、芯片DNA洗脱，3、用含dUTP的PCR反应体系扩增芯片DNA，4、PCR产物用磁珠纯化，5、使用单引物偏向扩增，该引物5’端经生物素标记，得到含有生物素单链与含有dUTP的链的杂合双链DNA，6、加入能够识别并切除dUTP的酶，将5步中的含有dUTP的母链消化，7、消化后产物经纯化，得到含有生物素标记的单链探针，8、稀释至所需浓度并进行分装保存。与市售合成的探针相比，酶法反应条件温和，成本降低，易于推广。 | ||
| 搜索关键词： | 多基因 捕获 探针 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种多基因捕获测序的单链探针制备方法，其特征在于：该方法至少包括如下步骤：(1)芯片合成，合成不同寡核苷酸的芯片，所述的芯片包含能够与靶序列结合的80bp‑120bp目标区域碱基，目标区域碱基两端分别连接15‑20bp碱基末端；(2)芯片DNA洗脱；(3)用含dUTP的PCR反应体系扩增芯片DNA，dUTP摩尔浓度范围为5μM‑750μM；(4)PCR产物用磁珠纯化；(5)将步骤(4)中纯化的PCR产物稀释，作为下一步PCR的模板，使用单引物偏向扩增，该引物5’端经生物素标记，得到含有生物素单链与含有dUTP的链的杂合双链DNA；(6)加入能够识别并切除dUTP的酶，将(5)步中的含有dUTP的母链消化；(7)消化后产物经纯化，得到含有生物素标记的单链探针；(8)对制备的单链探针进行电泳检测和浓度测定，得到每种单链探针物质的量为nmol级别，将质检合格的探针稀释保存。
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