[发明专利]胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法及应用

摘要

本发明公开了一种胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法及应用，其中构建方法包括构建Tmem30a基因条件性敲除纯合子小鼠，其Tmem30a基因的一个或多个外显子的两端插入同向排列的loxP位点，以及将该小鼠与胰岛β细胞特异的转基因鼠Ins2‑Cre交配，得到胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因的小鼠模型。该胰岛β细胞Tmem30a基因条件性敲除小鼠表现出葡萄糖不耐受，胰岛素敏感性差，可用作糖尿病研究模型。

主权项

一种胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将与小鼠Tmem30a基因同源的5’臂、含有报告基因LacZ的表达框、有NEO抗性基因的表达框、两端有同向排列loxP位点的第3外显子和3’端臂克隆到BAC载体以用于替换欲敲除的Tmem30a基因第3个外显子；2)利用DNA同源重组技术将Tmem30a基因中的第3个外显子替换，得到Tmem30a基因条件性敲除的小鼠胚胎干细胞；3)利用步骤2)得到的胚胎干细胞制备得到含Tmem30a基因敲除细胞的嵌合体小鼠；4)将步骤3)得到的嵌合体小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中筛选出Tmem30a基因敲除的杂合子小鼠；5)将步骤4)得到的杂合子小鼠动物与转基因鼠FLPer鼠交配繁育，得到Tmem30a基因条件性敲除杂合子小鼠；6)将步骤5)得到的Tmem30a基因条件性敲除杂合子小鼠相互交配繁育，得到Tmem30a基因条件性敲除纯合子小鼠；7)将步骤6)得到的Tmem30a基因条件性敲除纯合子小鼠与胰岛β细胞特异的转基因鼠Ins2‑Cre交配，得到胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠Tmem30a loxp/loxp，Ins2‑Cre。