[发明专利]一种利用Silwet L-77提高化学法转化大肠杆菌效率的方法

摘要

本发明公开一种生物技术领域的发明方法，利用表面活性剂Silwet L‑77提高化学法转化大肠杆菌效率的方法，其包括以下步骤：化学法制备大肠杆菌（E.coli）感受态细胞；配置浓度为0.05%~0.25%的的Silwet_L‑77母液；将质粒DNA和Silewet_L‑77加入感受态细胞，热激转化后获得克隆，本发明可以显著地提高化学法转化大肠杆菌的效率。而使用表面活性剂提高质粒转化大肠杆菌效率的方法尚未见报道。

主权项

一种利用Silwet_L‑77提高化学法转化大肠杆菌效率的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、用Inoue的方法或CaCl2法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞，每个1.5ml的Eppondorf试管分装100μl，备用；步骤二、配置浓度为0.05%~0.25%的Silwet_L‑77母液，备用；步骤三、在100μl的DH5α感受态细胞中加入1μ浓度为1ng~1μg/μl的质粒DNA, 加入1μ浓度为0.05%~0.25%的母液；步骤四、冰浴10分钟，42摄氏度热激90秒，冰浴3分钟后加入700μl SOC培养基，37摄氏度震荡培养45分钟后，5000rpm离心5分钟集菌，去700μl上清后重选菌体，涂布固体平板，37摄氏度培养10‑12小时。