[发明专利]一种基于快速克隆技术的环状RNA表达载体构建方法及其应用

摘要

环状RNA在体内外过表达时不容易形成环状结构，目前多数过表达环状RNA方法中只有10%左右的形成率，即使改良的方法中提高了表达量，但会将原本不属于环状RNA的序列加入环状RNA中。本发明是一种基于一步法快速克隆的、人工改造的、可以完整高效地表达环状RNA载体的构建方法及应用。利用特殊的环状RNA过表达序列框架，上下游特异性序列，酶切位点，以及利用一步法（快速克隆法）插入环状RNA序列的方法，达到高效、完整、便利地克隆及过表达环状RNA。该方法及载体可以广泛应用于各种环状RNA的表达，为研究环状RNA的作用机制提供便利条件，为应用环状RNA作为体内基因靶向治疗、药物筛选提供基础。

主权项

1.一种基于快速克隆技术的环状RNA表达载体构建方法，其特征在于，该构建方法采用特定序列的序列框架以及酶切位点经过一步克隆法得到完整无多余碱基序列的环状RNA；所述特定序列的序列框架包括上游特异性序列框架SEQ ID NUMBER.3、下游特异性序列框架SEQ ID NUMBER.4；其中，所述上游特异性序列框架SEQ ID NUMBER.3：CGGGCGCGGTGCCTCACGCCTGTAATCCCAGCACTTTGGGAGCCTGGGGCACTCTGACCATTCCCTTTCTTTCCCTCAGCTAGG；所述下游特异性序列框架SEQ ID NUMBER.4：CACGTGAGTATCAACTGCAGACGTTTCGTGCGGCGCCCCAGGCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCGTGAGGCACCGCGCCCG；所述酶切位点为EcoN1_CUT：CCTCAGCTAGG与Pml1_CUT：CACGTG。