[发明专利]一种组织工程皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损的实验研究方法

摘要

本发明公开了一种组织工程皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损的实验研究方法，包括以下步骤1)取健康雄性裸鼠分为2组，分别为组织工程组和空白对照组，每组10只裸鼠；2)待裸鼠麻醉后背部正中剪成直径约为1cm的圆形缺损；3)组织工程组裸鼠缺损处用构建的hAECs‑DED组织工程皮肤覆盖创面，空白对照组不用任何东西覆盖；4)进行术后创面愈合情况观察及组织学检测；5)于术后四周在裸鼠背部术区取材，组织切片，行HE染色；6)统计学分析。本发明将构建的hAECs‑DED组织工程皮肤移植于裸鼠创面，从创面愈合率、创面愈合时间、组织病理学等方面检测和了解组织工程皮肤产品用于修复裸鼠全层皮肤缺损的效果，为将来的临床应用提供实验依据与技术支持。

主权项

一种组织工程皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损的实验研究方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取3‑4周龄健康雄性裸鼠，20只，根据抽签法随机分为2组，分别为组织工程组和空白对照组，每组10只裸鼠；均以5％水合氯醛0.01ml/g进行腹腔注射，3‑5分钟后裸鼠进入麻醉状态；2)待裸鼠麻醉后将其固定,常规用酒精及聚维酮碘消毒裸鼠背部皮肤，铺洞巾；以裸鼠背部正中为中心点，用眼科剪剪成直径约为1cm的圆形缺损，使该处全层皮肤去除，后用青链霉素混合液清洗伤口，以预防感染；3)组织工程组裸鼠缺损处用构建的hAECs‑DED组织工程皮肤覆盖创面，所述的hAECs‑DED组织工程皮肤是以人羊膜上皮细胞(hAECs)作为种子细胞，以人去表皮的真皮组织(De‑epidermized dermis,DED)作为支架材料，将种子细胞种植于支架材料上构建而成的hAECs‑DED组织工程皮肤；空白对照组不用任何东西覆盖，后均用凡士林油纱布覆盖创面，打包缝合创面并稍加压包扎；每只分笼饲养；术后1周拆除纱布包并揭去油纱，常规换药，连续观察4周；4)术后创面愈合情况观察及组织学检测：术后连续观察创面的愈合情况，分别于一周，两周，三周，四周对比创面愈合情况，根据肉眼观察记录两组创面愈合时间；用透明薄膜法计算两组的创面愈合率，即创面愈合率＝(原始创面面积‑未愈合创面面积)/原始创面面积；5)于术后四周在裸鼠背部术区取材，用10％福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，组织切片，进行HE染色；6)统计学分析：采用SPSS19.0统计软件,计量资料采用成组t检验，计数资料采用卡方检验；P＜0.05为差异有统计学意义。