[发明专利]一种表达受茶碱调控的适体核酶修饰型sgRNA的载体及应用有效
| 申请号： | 201710184537.1 | 申请日： | 2017-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN107245493B | 公开（公告）日： | 2021-02-19 |
| 发明（设计）人： | 夏海滨;陈皓;郑晓晶;代鑫;李燕;陈芳 | 申请（专利权）人： | 陕西师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/113;C12N9/22 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 710062 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种表达受茶碱调控的适体核酶修饰型sgRNA的载体，在表达的sgRNA‑AZ 2.0骨架的四碱基环(tetraloop)以及茎环2(stem loop 2)位置插入适体核酶P1‑F5；通过Kpn Ⅰ与EcoR Ⅰ位点和EcoR Ⅰ与Spe Ⅰ位点分别将U6启动子、sgRNA‑AZ 2.0骨架依次连入载体pUC19/EKSHL中，获得载体pU6‑sgRNA‑AZ 2.0；使用BsaⅠ酶切载体pU6‑sgRNA‑AZ 2.0，并利用粘性末端设计并连入针对目标基因的sgRNA序列，获得pU6‑sgRNA‑AZ 2.0‑target site。能有效介导Cas9蛋白的基因组编辑作用，并使其编辑活性受到茶碱调控；且能介导dCas9‑KRAB蛋白对目的基因的转录抑制，并使其抑制活性受到茶碱调控。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 茶碱 调控 适体核酶 修饰 sgrna 载体 应用 | ||
【主权项】：
一种表达受茶碱调控的适体核酶修饰型sgRNA的载体，其特征在于，在表达的sgRNA‑AZ 2.0骨架的四碱基环(tetraloop)以及茎环2(stem loop2)位置插入适体核酶P1‑F5；通过Kpn Ⅰ与EcoR Ⅰ位点和EcoR Ⅰ与Spe Ⅰ位点分别将U6启动子、sgRNA‑AZ 2.0骨架依次连入载体pUC19/EKSHL中，获得载体pU6‑sgRNA‑AZ 2.0；使用BsaⅠ酶切载体pU6‑sgRNA‑AZ 2.0，并利用粘性末端连入针对目标基因的sgRNA序列，获得pU6‑sgRNA‑AZ 2.0‑target site。
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