[发明专利]一种微斑报春苣苔的无菌播种和组织培养方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种微斑报春苣苔的组织培养方法。一种微斑报春苣苔的无菌萌发和组织培养方法，包括如下步骤：无菌萌发、初代培养、不定芽增殖培养、愈伤组织分化、生根培养和炼苗移栽。本发明的微斑报春苣苔的组织培养方法具有种子萌发率高、成苗快、种苗品质好等特点，能在短期内获得大量的组培苗，是微斑报春苣苔种苗生产及资源保护的有效途径。

主权项

1.一种微斑报春苣苔的无菌播种和组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）种子的无菌萌发：取成熟未开裂的微斑报春苣苔的果荚，用洗洁精浸洗10‑15 min后在流水下冲洗干净10‑15 min，在超净工作台上先用75%酒精中浸泡果荚30‑40 s，无菌水冲洗3‑5次，再用0.1%升汞溶液浸泡果荚12‑15 min，无菌水冲洗3‑5次，在接种盘上切开果荚，并用经过消毒灭菌的勺子轻轻将种子拨入种子萌发培养基中，播种好的种子先在光照培养箱中暗培养至种子萌发，然后再转入培养室中光培养；所述的0.1%升汞溶液中加入有吐温‑20，每100mL0.1%升汞溶液中加入2滴吐温‑20；（2）初代培养：将已经萌发子叶但尚未长出真叶的小苗切成子叶、胚轴两部分，然后接入不同的初代培养基中；子叶28‑32 d可直接诱导出不定芽，并且在子叶基部有愈伤组织产生；胚轴30 d能诱导愈伤组织；（3）不定芽的增殖培养：将具有1对以上叶片的不定芽切取下来，接入增殖培养基中培养26‑28 d；（4）愈伤组织的分化培养：将愈伤组织切成1 cm×1 cm的小块接入分化培养基中培养29‑30 d；（5）生根培养：当组培芽具有2对以上叶片时，转接于生根培养基中培养23‑25 d；（6）炼苗移栽：将具有2‑3对叶片的生根苗移出培养室，在温室中炼苗10‑14 d；洗净培养基移栽到装有基质的50孔穴盘中，浇透定根水后，将移栽小苗置于有遮阳网的荫棚下，透光率为40‑50%，移栽7 d后，用1/2MS营养液浇淋，连续淋2次，时间间隔为7 d，移栽后20 d后统计成活率；步骤（1）中所述的萌发培养基以MS+GA31.0‑2.0 mg/L+活性炭0.5 g/L；步骤（2）中用于子叶的不定芽诱导培养基为MS+KT 1.0‑2.0 mg/L+NAA 0.01‑0.1 mg/L，愈伤组织诱导培养基为MS+CPPU 0.1‑1.0 mg/L+2,4‑D 1.5‑2.0 mg/L；用于胚轴的愈伤组织诱导培养基为MS+CPPU0.1‑1.0 mg/L+2,4‑D1.5‑2.0 mg/L；步骤（3）中所述的增殖培养基以MS+6‑BA1.0‑3.0 mg/L+IBA0.1‑0.30 mg/L+土豆30 g/L+香蕉30 g/L+苹果20g/L+椰汁100 ml/L；步骤（4）中所述的分化培养基为MS+ZT0.1‑1.0 mg/L+IBA0.1‑0.3 mg/L+土豆30 g/L+香蕉30 g/L+苹果20 g/L+椰汁100 ml/L；步骤（5）中所述的生根培养基为1/2MS+IBA1.0‑3.0 mg/L+椰汁50 ml/L+活性炭1.0 g/L。