[发明专利]人结肠癌细胞特异性结合多肽的筛选方法及其应用

摘要

本发明涉及一种结肠癌细胞表面特异性结合多肽及其应用。包括以下步骤：步骤(1)将噬菌体十二肽库扩增后的克隆株与结肠癌细胞一同孵育，弃去未与结肠癌细胞结合的克隆株，筛选后将与结肠癌细胞结合的克隆株扩增；步骤(2)：将步骤(1)循环4次，噬菌体克隆株不断富集，得到与结肠癌细胞具有较高亲和力的克隆株，在液相中反复验证其结合能力；步骤(3)：将(2)中的噬菌体克隆株与正常结肠上皮细胞孵育，去除非特异性结合克隆株。步骤(4)对阳性克隆株进行序列测定，步骤(5)通过免疫荧光在结肠癌细胞和组织上分别验证多肽的特异性。本发明就是利用噬菌体展示肽库技术来筛选与结肠癌细胞特异性结合的短肽，将其作为分子标志或靶向载体等，用于靶向治疗药物。

主权项

一种结肠癌细胞表面特异性结合多肽的筛选方法及其应用，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：利用全细胞筛选法，将随机十二肽库噬菌体克隆株与结肠癌细胞一同孵育，弃去未与所述的结肠癌细胞结合的克隆株，将与所述的结肠癌细胞结合的克隆株扩增；步骤(2)：将步骤(1)循环4次，最大限度的富集与所述结肠癌细胞结合的克隆株，得到与结肠癌细胞具有较高亲和力结合克隆株，进行扩增，得到扩增后的克隆株；步骤(3)：将所述的扩增后的克隆株与正常结肠上皮细胞孵育，进行负性筛选，去除与正常细胞结合的非特异性克隆株，得到最终扩增后的克隆株。步骤(4)：将最终扩增后克隆株进行序列测定，分析出多肽序列。