[发明专利]一种鱼类单细胞悬液的制备方法

摘要

本申请公开了一种鱼类单细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：PBS试剂、D‑Han氏液和IV型胶原酶液的配制，准备鱼的肾脏组织块，用PBS冲洗肾脏组织3次以上；将组织块放人冰浴中的平皿里，加入PBS，剪切成细小碎块，将组织块放入高通量组织研磨器离心管中；在离心管中加入IV型胶原酶，同时加入PBS定容至4ml，放入氧化锆球进行研磨，将组织匀浆酶解消化；过滤，离心，PBS冲洗，离心，弃上清液除去细胞碎片，过滤细胞悬液并用PBS定容为3ml，4℃保存待用。本发明采用酶解研磨法，结合了研磨法和酶解法两种方法的优点，通过酶解研磨对组织处理更充分，解决了制备鱼类单细胞悬液细胞得率低和细胞活力低的问题。

主权项

一种鱼类单细胞悬液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)PBS试剂、D‑Han氏液和IV型胶原酶液的配制；2)准备试验鱼的肾脏组织块，放入提前置于冰浴中的平皿中，用PBS冲洗肾脏组织3次以上，将组织表面的血细胞冲洗干净；3)将肾脏组织块放人冰浴中的平皿里，然后加入PBS，将肾脏组织剪切成为1mm3细小碎块，移液枪小心吸走多余PBS，将肾脏组织块放入SCIENTZ 50高通量组织研磨器5ml离心管中；4)将IV型胶原酶在水浴中加热，取2ml加热后的IV型胶原酶加入离心管中，同时加入水浴预热的PBS定容至4ml，放入2颗氧化锆球进行研磨，研磨好后打开研磨器开关将组织匀浆放入恒温水浴振荡器中酶解消化；5)用细胞筛过滤到预冷的5ml离心管内进行离心处理，PBS洗3次，每次进行低速离心处理，弃上清液除去细胞碎片，用细胞筛过滤细胞悬液并用PBS定容为3ml，4℃保存待用。