[发明专利]一种神经胶质瘤全肿瘤抗原制备方法及装置

摘要

本发明涉及一种神经胶质瘤全肿瘤抗原制备方法及装置，包括如下步骤：采用无血清培养液对所述神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞进行的增殖培养；将对数生长期的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞进行预处理；将预处理后的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞混合放置于裂解处理室一中进行脉冲裂解及同步离心处理；弃上清液，将以上处理后的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞混合液放置于裂解处理室二中进行再次脉冲裂解，即收获神经胶质瘤全肿瘤抗原。本发明采用低频及高频陡脉冲实现神经胶质瘤干细胞及神经胶质瘤非干细胞分阶段处理与裂解，操作简单，裂解更加充分、快速，可获得更加完整的神经胶质瘤肿瘤抗原。

主权项

1.一种神经胶质瘤全肿瘤抗原制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将新鲜的人脑胶质瘤组织用缓冲液洗净血污，剪切成lmm³大小的胶质瘤组织块备用；将神经胶质瘤肿瘤组织块中获取神经胶质瘤单细胞并进行增殖培养；增殖后的神经胶质瘤单细胞分离出神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞；采用无血清培养液对所述神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞进行的增殖培养，并获得对数生长期的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞；将对数生长期的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞放置于预处理室一、预处理室二中进行预处理；将个数比为1:2‑1:5的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞分别放置于预处理室一及预处理室二中进行裂解预处理5‑10min；所述预处理室一中以CO₂气氛完全填充，温度保持为37℃‑45℃，电脉冲参数设置为：峰值1‑2kV/cm、脉宽100μs、频率1‑4Hz，脉冲个数4‑10；所述预处理室二中以CO₂气氛完全填充，温度保持为40℃‑45℃，电脉冲参数设置为：峰值2‑5kV/cm、脉宽50μs、频率4‑8Hz，脉冲个数6‑10；将预处理后的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞混合放置于裂解处理室一中进行脉冲裂解及同步离心处理；弃上清液，将预处理后的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞混合放置于裂解处理室一中进行脉冲裂解及同步离心处理4.5‑10min；所述裂解处理室一中以CO₂气氛完全填充，温度设置为：从37℃每30s上升1℃至45℃；电脉冲参数设置为：20‑250V,脉冲宽度1‑20ps,重复频率10Hz‑1kHz独立可调的指数衰减波形,其脉冲陡度即上升时间90‑180ns；所述离心参数为：1000r/min上升至5000r/min，5min内完成；弃上清液，将以上处理后的神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞混合液放置于裂解处理室二中进行再次脉冲裂解，即收获神经胶质瘤全肿瘤抗原。