[发明专利]一种欧洲山杨品系组培育苗方法

摘要

本发明提供了一种欧洲山杨品系组培育苗方法，将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；将外植体接种到不定芽分化培养基中，分化培养30～45d，得到欧洲山杨不定芽；欧洲山杨不定芽接种到继代增殖培养基中进行继代培养，得到1.2～2.0cm高的欧洲山杨不定芽；将1.2～2.0cm的欧洲山杨不定芽转接到不定芽生根培养基中进行生根培养，得到欧洲山杨再生组培苗。采用本发明的组培育苗方法，得到组培苗的成活率为91.4～91.6％。本发明的组培育苗方法可使以一个茎段为基数，经培养一年内可增殖到10 000～100 000株组培苗。

主权项

1.一种欧洲山杨品系组培育苗方法，包括以下步骤：1)将带有腋芽的茎段依次经过酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗后，去掉茎段的两端1～2mm，得到外植体；2)将所述步骤1)得到的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，分化培养30～45d，得到欧洲山杨不定芽；3)将所述步骤2)得到的欧洲山杨不定芽接种到已灭菌的继代增殖培养基中进行继代培养，得到1.2～2.0cm高的欧洲山杨不定芽；4)将所述步骤3)得到的1.2～2.0cm的欧洲山杨不定芽转接到已灭菌的不定芽生根培养基中进行生根培养，得到欧洲山杨再生组培苗；所述步骤2)中的不定芽分化培养基为以下浓度的组分：NH4NO3 150～250mg/L、KNO3 150～200mg/L、CaCl2 40～55mg/L、MgSO4 170～200mg/L、Ca(NO3)2 260～290mg/L、K2SO4 140～160mg/L、KH2PO4 170～200mg/L、KI 0.41～0.42mg/L、H3BO3 2.5～3.5mg/L、MnSO4 11～12mg/L、ZnSO4 4.0～4.5mg/L、Na2MoO4 0.12～0.13mg/L、CuSO4 0.012～0.013mg/L、FeSO4 13.0～14.5mg/L、Na2‑EDTA 18～19mg/L、肌醇40～60mg/L、盐酸吡哆醇0.2～0.3mg/L、烟酸0.2～0.3mg/L、盐酸硫胺素2～3mg/L、甘氨酸0.5～1.5mg/L、6‑苄基腺嘌呤0.3～1.0mg/L，余量为水；所述步骤3)中的继代增殖培养基包括以下浓度的组分：KNO3 300～400mg/L、NH4NO3 350～450mg/L、CaCl2 90～100mg/L、MgSO4 330～400mg/L、Ca(NO3)2 500～600mg/L、K2SO4 550～650mg/L、KH2PO4 350～400mg/L、FeSO4 25～30mg/L、Na2‑EDTA 35～40mg/L、KI 0.05～1.0mg/L、H3BO3 6.26.0～6.5mg/L、MnSO4 20～25mg/L、ZnSO4 8.0～9.0mg/L、Na2MoO4 0.2～0.3mg/L、CuSO4 0.2～0.3mg/L、盐酸硫胺素3～8mg/L、烟酸0.3～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.3～0.8mg/L、肌醇90～110mg/L、甘氨酸1～3mg/L、6‑苄基腺嘌呤1.0～1.5mg/L、萘乙酸0.05～0.08mg/L，余量为水；所述步骤4)中的不定芽生根培养基包括以下浓度的组分：KNO3 300～400mg/L、NH4NO3 350～450mg/L、CaCl2 90～100mg/L、MgSO4 330～400mg/L、Ca(NO3)2 500～600mg/L、K2SO4 550～650mg/L、KH2PO4 350～400mg/L、FeSO4 25～30mg/L、Na2‑EDTA 35～40mg/L、KI 0.05～1.0mg/L、H3BO3 6.26.0～6.5mg/L、MnSO4 20～25mg/L、ZnSO4 8.0～9.0mg/L、Na2MoO4 0.2～0.3mg/L、CuSO4 0.2～0.3mg/L、盐酸硫胺素3～8mg/L、烟酸0.3～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.3～0.8mg/L、肌醇90～110mg/L、甘氨酸1～3mg/L、吲哚丁酸1.0mg/L、萘乙酸0.005～0.015mg/L，余量为水。