[发明专利]一种淘汰转基因玉米遗传不稳定植株的筛选方法

摘要

本发明公开了一种淘汰转基因玉米遗传不稳定植株的筛选方法，本发明将含有BAR基因的载体pCAMBIA2300‑BAR导入非转基因玉米材料中，获得T0代转化植株幼苗后移栽入大田，进行常规农事管理并自花授粉，成熟期收获T1代种子；对T1代植株进行三次不同强度的除草剂草铵膦水溶液喷施筛选，淘汰死亡植株；将存活植株自花授粉并收获种子。本发明提供的方法操作流程清晰简单，筛选过程快速高效，筛选结果稳定可靠，能够有效去除玉米转基因事件中广泛存在的基因转座、沉默或丢失等遗传不稳定现象，提高转基因玉米后代的遗传稳定性，为利用基因工程方法培育优质玉米新品种提供技术辅助与支持，具有较高的田间应用和生产推广价值。

主权项

一种淘汰转基因玉米遗传不稳定植株的筛选方法，其特征是包括如下步骤：(1)转基因玉米植株的获取：采用基因工程方法将含有BAR基因的载体pCAMBIA2300‑BAR导入非转基因玉米材料中，获得T0代转化植株幼苗，待生长健壮后移栽入大田，进行常规农事管理并自花授粉，成熟期收获T1代种子；(2)除草剂草铵膦水溶液的喷施筛选挑选饱满无病的T1代种子，种植于大田并喷灌浇水；待T1代植株生长至三叶期，进行初次草铵膦水溶液喷施处理：喷施量为0.2‑0.3L/m2；初次喷施处理7‑9天，进行第二次草铵膦水溶液喷施处理：喷施量为0.5‑0.7L/m2；第二次喷施处理15‑20天，进行第三次草铵膦水溶液喷施处理：喷施量为1.0‑1.2L/m2；三次喷施处理均采用叶片喷施方式，草铵膦水溶液浓度为450‑650mg/L；三次喷施处理期间，持续观察植株存活情况，不断淘汰死亡植株；(3)存活植株的自花授粉与收获：对经过三次草铵膦水溶液喷施处理的存活植株进行常规农事管理并自花授粉；授粉40天后，玉米雌穗苞叶逐渐变黄即可收获，干燥、脱粒后置于‑20℃环境下保藏。