[发明专利]一种免标记铅离子可视化检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种免标记铅离子可视化检测方法及检测试剂盒。以铅离子特异性识别的脱氧核酶为分子识别元件，设计茎环结构核酸，结合核酸外切酶III的选择性切割作用，实现检测信号的循环放大。以G‑四聚体为信号报告分子，实现免标记分析。本发明具有较高的灵敏度，对铅离子的检测限为10 pM，检测具有很好的特异性，常见干扰物对检测不产生影响。检测过程无需检测仪器，结果直接肉眼可见，具有操作简单，成本低廉，响应迅速等优点，可用于环境或食品样品中铅离子含量的快速检测。

主权项

一种免标记铅离子可视化检测试剂盒，包括DNA杂交缓冲液，显色缓冲液体系，氯高铁血红素，其特征在于，还包括下列成分：底物链核酸序列17DS：碱基数为40‑48个，从5'端开始向3'端延伸过程中，包含有一段ACTAT‑rA‑G‑GAAGA的序列；其中rA为切割位点，rA‑G左右两旁的5个碱基与17E互补；17DS的3'端有至少6个碱基不与17E互补；当有铅离子存在时，催化链切割底物链，切割位点为rA，切割后的底物链分割为两部分，其中靠近17DS的5'端部分记名为A区，用于启动下一步反应；催化链核酸序列17E：碱基数为36‑42个，从5'端开始向3'端延伸过程中，包含有一段TCTTC‑TCCGAGCCGGTCGAAA‑TAGTG的序列，其中TCCGAGCCGGTCGAAA构成一个凸起部分，凸起部分左右两旁的5个碱基与17DS互补；17E的3'端至少有6个碱基不与17DS互补；核酸序列H1；从3'端开始依次为B区域、C区域和D区域，其中C区和部分D区互补，构成茎环结构的茎部分，B凸起于茎结构外；H1的B与17DS切割后的A区的5'端互补，A的3'端凸起；D区为富含G碱基的核酸序列，加入氯高铁血红素后，会形成具有催化活性的G四聚体结构；以及核酸外切酶III。