[发明专利]一种胰激肽原酶及其制备工艺

摘要

本发明涉及一种胰激肽原酶及其制备工艺，胰激肽原酶的制备步骤为：冻猪胰脏解冻、绞碎、磨制、预处理、纤维分离、活化、活化胰浆过滤、醇沉、重相压滤、制粒等19个步骤，最终获得胰激肽原酶。本发明实现了胰脏中胰激肽原酶和弹性蛋白酶充分激活，为胰激肽原酶及胰弹性蛋白酶进一步联产创造可能性；本发明中所得胰激肽原酶中胰弹性酶活力非常高；本发明极大提高了过滤速度，实现工业化生产；本发明采用沸腾干燥方式，投资小、耗时短、活力损耗小。

主权项

一种胰激肽原酶的制备工艺，其特征在于，制备工艺具体步骤如下：(1)冻猪胰脏解冻冻猪胰脏在无菌的解冻间解冻架上解冻至半化状态，保证胰脏中心温度≤0℃，解冻间温度为15‑20℃，空气相对湿度≥80％RH；(2)绞碎将解冻后的猪胰脏在切绞一体机中进行切绞，切绞过程猪胰脏浆的温度≤10℃；(3)磨制将绞碎的猪胰脏浆置于无菌的磨机中，进行磨浆，经两台串联胶体磨机研磨两遍后送入1号提取罐，边搅拌边加入胰脏活化液、碳酸氢钠和乳酸，转速为30HZ；胰脏活化液、碳酸氢钠、乳酸的终浓度(质量浓度)分别为5‑10％、0.01％和0.05％；(4)预处理1号提取罐中，搅拌5min后，缓慢升温5小时，使物料温度升至36‑48℃，升温过程中间隙搅拌，每小时搅拌一次，每次15min；(5)纤维分离将预处理后的物料通过除浆机分离纤维，获得纤维组织和浆液，浆液中不含纤维，然后将浆液打入2号提取罐；(6)活化2号提取罐中，启动搅拌，转速为15HZ，利用夹层热水对2号提取罐内的物料缓慢升温，物料在8‑10小时缓慢升至10‑15℃，物料在10‑15℃条件下保温6小时；(7)活化胰浆过滤把保温后的物料打入隔膜压滤机，收集滤液，隔膜压滤机中的每秒每平方米滤布的透气量为500‑600L，滤布材质为丙纶单丝布；(8)醇沉将滤液预冷至10℃，搅拌下加入15℃的无水乙醇，至酒精度为55°时截止，然后静止3小时；(9)重相压滤抽去醇沉后的上清液，把醇沉重相打入压滤机压滤，压至滤饼不再出液，收集压滤饼；(10)制粒将收集的压滤饼过旋转式制粒机进行破碎至粒径为2‑3mm，制粒过程中温度小于等于80℃；(11)脱脂、脱水制粒物料投入脱脂罐，加入无水乙醇至浸没物料，进行脱脂、脱水，去除轻相，收集重相；(12)提取把脱脂后物料抽入3号提取罐，加入10倍物料重量浓度为0.02mol/L的醋酸钠溶液，且醋酸钠溶液中含1mmol/L氯化钙，45℃下搅拌4h，加热至65℃并保温30分钟，立即速冷至室温，然后进行离心，转速为4000rpm，时间为10min；(13)吸附收集上清液打入1号吸附罐，加入2倍量纯水，投入处理过的DEAE纤维素树脂，每吨上清液投入10kgDEAE纤维素树脂，65℃搅拌吸附2小时，静置10分钟，排除料液，收集树脂；DEAE纤维素树脂的处理方法：用pH为7.0的0.05mol/L的磷酸盐缓冲液浸泡DEAE纤维素树脂24小时；(14)洗脱将吸附后的树脂加入洗脱罐，用质量分数为5％的硫酸铵洗脱树脂常温洗脱2.5小时，重复洗脱一次，合并两次的洗脱液；(15)醇沉把合并的两次洗脱液打入醇沉罐，加入温度为零下10℃的无水乙醇，至酒精度为65度，继续搅拌1小时，转速为15HZ，静置1小时；(16)重相压滤将醇沉后的物料虹吸上清液，把醇沉重相打入隔膜压滤机开启压滤，至不出液为止，收集压滤饼；(17)制粒把收集的压滤饼通过旋转式制粒机进行破碎至粒径为2‑3mm，制粒过程中温度小于等于80℃；(18)脱水将制粒好的物料投入脱水桶，加入无水乙醇浸没物料，进行脱水，然后进行离心，转速为4000rpm，时间为10min，收集固体物料；(19)干燥将脱水后的物体物料转移至沸腾干燥箱内干燥，密封好后，开启进风，待乙醇抽去完成后，开启进风加热，进风温度为45℃，干燥时间为3‑5小时，干燥后即得。