[发明专利]一种侵染生姜的黄瓜花叶病毒抗血清的制备方法

摘要

本发明公开了一种制备侵染生姜黄瓜花叶病毒抗血清的制备方法及其应用，包括以下步骤粗病毒的提取和纯化、制备黄瓜花叶病毒外壳蛋白的凝胶、将含外壳蛋白的凝胶加生理盐水磨细后免疫注射小鼠，获得抗血清。本发明用不同剂量的黄瓜花叶病毒颗粒，采用5‑20% SDS‑PAGE梯度凝胶制备电泳分离外壳蛋白，外壳蛋白连同聚丙烯酰胺凝胶免疫小鼠，均获得高效价的抗血清，说明该技术实用、可靠。将用此方法获得的抗血清在侵染生姜的黄瓜花叶病毒检测上的应用，可以快速检测出侵染的生姜黄瓜花叶病毒，大大方便该病毒的检测。

主权项

一种制备侵染生姜的黄瓜花叶病毒抗血清的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、粗病毒的提取将黄瓜花叶病毒侵染的生姜病叶匀浆，过滤和低速离心去除大的固体杂质，四氯化碳去除叶绿素，加入聚乙二醇6000（PEG6000）、NaCl和Triton‑X 100后静置使病毒粒子沉淀，用20%蔗糖垫进一步纯化获得的黄瓜花叶病毒颗粒， 将其溶解于PBS中，得到病毒悬液，于‑80°C储存备用；b、黄瓜花叶病毒外壳蛋白的5‑20% SDS‑PAGE梯度分离纯化将病毒悬液与等体积的1.5‑2.5倍SDS上样缓冲液混合，沸水浴加热8‑12分钟，冷却后离心除去沉淀，然后将样品加入制备型的5‑20% SDS‑PAGE梯度凝胶板中电泳，完毕后凝胶用4°C的0.25M KCl浸泡染色，切下乳白色的黄瓜花叶病毒外壳蛋白条带，平分3‑5份；c、将含外壳蛋白的凝胶加生理盐水磨细后，免疫注射3‑5只小鼠，4次免疫注射，两次之间间隔6‑7天，第一次注射方式为皮下注射0.24‑0.26 mL,腹腔注射0.24‑0.26 mL，第二、第三和第四次注射均腹腔注射0.48‑0.52 mL，第四次注射后第3天断头取血，6小时后离心获得抗血清。