[发明专利]一种抗原特异性T细胞的培养方法和一种DC细胞抗原递呈能力检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明提供一种抗原特异性T细胞培养方法、一种DC抗原递呈能力检测试剂盒及其检测方法。所述抗原特异性T细胞的培养方法，按如下步骤制备得到（1）分离人外周血单核细胞；（2）用人CMV抗原肽诱导PBMC中的T细胞；（3）扩增人CMV抗原肽特异性T细胞。本方法能快速获得更多扩增倍数抗原特异性T细胞，得到的抗原特异性T细胞在收到再刺激时具有更高的应答效率。所述DC抗原递呈能力检测试剂盒以人CMV抗原特异性T细胞为传感检测平台，只需简单的共孵育即可完成反应，操作简单，以流式细胞术检测T细胞应答率高，敏感性高，特异性好，能够准确反应DC细胞抗原递呈能力。

主权项

一种抗原特异性T细胞的培养方法，其特征在于，它按如下步骤制备：（1）分离人外周血单核细胞既PBMC从供体抽取10mL抗凝血，用2倍体积的PBS稀释，在稀释后的混合液体底部加入5mL人淋巴细胞分离液，离心后收集中间云雾层细胞既PBMC；（2）用人CMV抗原肽诱导PBMC中的T细胞将步骤（1）分离得到的PBMC计数，以2×106/mL重悬于CMX培养基中，每孔2mL细胞悬液接种于6孔细胞培养板，将所述6孔细胞培养板放入 37℃、5%（V/V）CO2的恒温培养箱中静置1‑2h，然后取出未贴壁的细胞，再加入终浓度为20ng/mL的人CMV抗原肽多表位混合物，以5mL每孔细胞悬液接种于新的6孔细胞培养板，孵育48小时，所述CMX培养基为含10%（V/V）胎牛血清的混合培养基，所述混合培养基为RPMI 1640培养基与X‑VIVO 15培养基以体积比1:1混和组成；（3）扩增人CMV抗原肽特异性T细胞孵育后，在步骤（2）中含人CMV抗原肽的PBMC培养体系中加入终浓度为1000U/mL的人白细胞介素2（hIL‑2），收集PBMC，然后加入等体积的所述CMX培养基,本次添加的所述CMX培养基中含终浓度为1000U/mL的hIL‑2，再将最终的PBMC培养体系扩增至2倍量的6孔板培养，保持每孔5mL细胞悬液；每隔2‑3天，按同样方法将上述PBMC培养体系扩增至2倍量的6孔板培养，共培养2周。