[发明专利]一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法在审
| 申请号： | 201710065515.3 | 申请日： | 2017-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN106755115A | 公开（公告）日： | 2017-05-31 |
| 发明（设计）人： | 徐洋 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学;广东圣赛生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京东正专利代理事务所(普通合伙)11312 | 代理人： | 李梦福 |
| 地址： | 510000 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法，包括以下步骤将针对大鼠DNA的Prkdc和IL2Rγ基因敲除的gRNA分别进行体外转录，再分别与体外转录的CAS9蛋白mRNA混合，冻存于无RNA酶的超纯水中，得到相应的注射液A及B；将人SIRPa基因组DNA扩增，纯化，冻存于无RNA酶的超纯水中，得注射液C；采用显微注射法将注射液A和B分别注射进不同的大鼠受精卵的胞质中，将注射液C注射进另一大鼠受精卵的原核中，将三种受精卵移植入不同假孕雌鼠体内，培育分别得到第二代大鼠A，B和C；将第二代大鼠A、B和C进行杂交，繁殖F1代；再将F1代进行杂交，得到敲除了IL2Rγ和Prkdc基因并转入了人SIRPa基因的免疫缺陷大鼠模型。该大鼠模型可以让人类细胞高效植入，符合试验指标，品系背景纯正。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 免疫 缺陷 大鼠 模型 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种免疫缺陷大鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将针对大鼠DNA的Prkdc和IL2Rγ基因敲除的gRNA分别进行体外转录，再分别与体外转录的CAS9蛋白mRNA混合，冻存于无RNA酶的超纯水中，得到相应的注射液A及注射液B；(2)将人SIRPa基因组DNA扩增，纯化，冻存于无RNA酶的超纯水中，得到注射液C；(3)采用显微注射法将注射液A和注射液B分别注射进不同的大鼠受精卵的胞质中，然后将大鼠受精卵分别移植入不同假孕雌鼠体内，培育得到第二代大鼠A和第二代大鼠B；(4)采用显微注射法将注射液C注射进大鼠受精卵的原核中，然后将大鼠受精卵移植入假孕雌鼠体内，培育得到第二代大鼠C；(5)将第二代大鼠A、第二代大鼠B和第二代大鼠C进行杂交，繁殖F1代；再将F1代进行杂交，得到敲除了IL2Rγ和Prkdc基因并转入了人SIRPa基因的免疫缺陷大鼠模型。
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