[发明专利]一种羰基还原酶、突变体及其在制备他汀合成中间体中的应用

摘要

本发明涉及一种来源于短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CGMCC 1.3258的羰基还原酶及其活性提高的突变体，其基因、含有该基因的重组表达载体和重组表达转化体，以及利用该重组羰基还原酶或重组表达转化体作为催化剂催化不对称还原制备手性羟基化合物的应用，特别是阿托伐他汀手性中间体6‑氰基‑(3R,5R)‑二羟基己酸叔丁酯的生物催化合成方面的应用。与不对称还原制备6‑氰基‑(3R,5R)‑二羟基己酸叔丁酯的其他方法相比，本发明具有底物浓度高、反应条件温和、环境友好、产率高、产品光学纯度高等优势，因此在阿托伐他汀手性侧链的工业化生产中具有很好的应用前景。

主权项

1.一种羰基还原酶，其特征在于，所述羰基还原酶是具有如下序列的蛋白质：(1)具有SEQ ID No.2所示氨基酸序列；(2)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为丙氨酸；(3)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第198位的缬氨酸替换为异亮氨酸，第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(4)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸，第243位的缬氨酸替换为异亮氨酸；(5)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第154位的甲硫氨酸替换为异亮氨酸，第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(6)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第96位的缬氨酸替换为天冬氨酸，第97位的天冬酰胺替换为天冬氨酸，第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(7)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第39位的天冬酰胺替换为缬氨酸，第40位的组氨酸替换为天冬氨酸，第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(8)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第96位的缬氨酸替换为天冬氨酸，第97位的天冬酰胺替换为天冬氨酸，第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为丙氨酸，第243位的缬氨酸替换为异亮氨酸；(9)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第201位的甘氨酸替换为天冬氨酸，第202位的丙氨酸替换为亮氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(10)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第201位的甘氨酸替换为组氨酸，第202位的丙氨酸替换为异亮氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(11)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第201位的甘氨酸替换为天冬氨酸，第202位的丙氨酸替换为缬氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(12)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第201位的甘氨酸替换为组氨酸，第202位的丙氨酸替换为亮氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(13)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第154位的甲硫氨酸替换为异亮氨酸，第155位的丙氨酸替换为天冬氨酸，第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(14)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第154位的甲硫氨酸替换为丝氨酸，第155位的丙氨酸替换为天冬氨酸，第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(15)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第154位的甲硫氨酸替换为缬氨酸，第155位的丙氨酸替换为天冬氨酸，第201位的甘氨酸替换为丙氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(16)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第198位的缬氨酸替换为异亮氨酸，第201位的甘氨酸替换为天冬氨酸，第202位的丙氨酸替换为亮氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸；(17)将如序列表中SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第154位的甲硫氨酸替换为异亮氨酸，第155位的丙氨酸替换为天冬氨酸，第201位的甘氨酸替换为天冬氨酸，第202位的丙氨酸替换为亮氨酸，第204位的天冬氨酸替换为赖氨酸。