[发明专利]汉坦病毒S基因克隆、表达、单克隆抗体的制备方法及其应用

摘要

一种汉坦病毒S基因克隆、表达、单克隆抗体制备方法，包括设计扩增汉坦病毒S基因完整开放阅读框特异性引物，扩增汉坦病毒S基因；将扩增的汉坦病毒S基因克隆到pGM－T载体，转化Ecoli.TOP10感受态细胞，得到TA克隆阳性质粒，克隆到pGEX－6p－2原核表达载体，得到重组质粒pGEX－6P－2/S；将重组质粒pGEX－6P－2/S转化Ecoli.BL21菌体中，经IPTG诱导表达，得到包涵体；包涵体经溶解与复性得到重组蛋白；重组蛋白免疫Balb/c小鼠；小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，选择性培养；阳性克隆筛选；单克隆抗体制备、亚型鉴定及效价检测。同时提供一种汉坦病毒S基因单克隆抗体应用。

主权项

一种汉坦病毒S基因克隆、表达、单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述方法包括：设计一对扩增汉坦病毒S基因完整开放阅读框的特异性引物，通过RT－PCR扩增汉坦病毒S基因；将扩增的汉坦病毒S基因克隆到pGM－T载体，转化Ecoli.TOP10感受态细胞，得到TA克隆阳性质粒；TA克隆阳性质粒克隆到pGEX－6p－2原核表达载体，得到重组质粒pGEX－6P－2/S；将重组质粒pGEX－6P－2/S转化Ecoli.BL21菌体中，经IPTG诱导表达，得到包涵体；包涵体经溶解与复性，得到GST－NP重组蛋白；GST－NP重组蛋白免疫Balb/c小鼠；小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，选择性培养；阳性克隆筛选；以及单克隆抗体制备、亚型鉴定以及效价检测。