[发明专利]一种促进角膜内皮细胞功能和特性的方法

摘要

本发明公开了一种促进角膜内皮细胞功能和特性的方法，包括以下步骤：分离和培养人眼眶脂肪干细胞并提取条件培养基；分离和培养原代人角膜内皮细胞；在培养人角膜内皮细胞的基础培养基中加入所述条件培养基对人角膜内皮细胞进行培养增殖。本发明利用从人眼眶脂肪干细胞提取的条件培养基培养得到的人角膜内皮细胞的贴壁及增殖能力强。经过试验得到，该方法下体外培养的人角膜内皮细胞可以传10代以上，扩增倍数更多，并能保持人角膜内皮细胞的形态及功能。动物实验证实该方法下体外培养的人角膜内皮细胞具有优异的细胞修复功能。

主权项

1.一种促进角膜内皮细胞功能和特性的方法，其特征是，包括以下步骤：分离和培养人眼眶脂肪干细胞并提取条件培养基；分离和培养原代人角膜内皮细胞；在培养人角膜内皮细胞的培养基中加入所述条件培养基对人角膜内皮细胞进行培养增殖；其中，分离和培养人眼眶脂肪干细胞的方法包括以下步骤：无菌条件收集人眼眶脂肪组织，PBS冲洗数遍，用乙醇浸泡30s，再采用PBS冲洗数遍，剔除肉眼可见的血管及结缔组织，剪碎至颗粒状，加入胶原酶消化液，置于恒温摇床中振荡消化；然后加入同体积含有FBS的低糖DMEM培养基中和，离心；弃去上层脂肪及液体，无菌PBS重悬，离心，弃去上层液体，加入DMEM培养基，滤网过滤，混匀后加入无菌培养皿，置于5％CO2、37℃培养箱中培养；48‑72小时后首次换液，之后每2‑3天换液1次，待细胞融合至80‑90％时进行传代培养。