[发明专利]一种外泌体miRNA精确获取的方法在审
| 申请号： | 201710020442.6 | 申请日： | 2017-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN106636070A | 公开（公告）日： | 2017-05-10 |
| 发明（设计）人： | 朱小兰;许文林;李月峰;陈小芳;殷新明;徐宇浩;魏虹 | 申请（专利权）人： | 朱小兰 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 212000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种外泌体miRNA精确获取的方法，包括以下步骤1)从待分离样品中分离获得外泌体；2)从外泌体中提取RNA，获得外泌体总RNA；3)在外泌体总RNA上连接特异性唯一标签接头，获得带特异性接头的总RNA；4)以带特异性接头的总RNA为模板进行反转录合成cDNA，获得反转录产物；5)TBE‑PAGE电泳回收反转录产物中150～170bp的cDNA片段，即得到miRNA。本发明提供的方法不仅避免了扩增时分子间存在的偏好性，而且有效实现单个模板的精确计数，可以精确检测低于10个拷贝以下的miRNA分子。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 外泌体 mirna 精确 获取 方法 | ||
【主权项】：
一种外泌体miRNA精确获取的方法，包括以下步骤：1)从待分离样品中分离获得外泌体；2)从外泌体中提取总RNA，获得外泌体总RNA；3)在外泌体总RNA上连接特异性唯一标签接头，获得带特异性接头的总RNA；4)以带特异性接头的总RNA为模板进行反转录合成cDNA，获得反转录产物；5)TBE‑PAGE电泳回收反转录产物中150～170bp的cDNA片段，即得到miRNA；所述特异性唯一标签接头为miRNA常规接头添加8个随机碱基N和3个固定碱基CGA。
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