[发明专利]一种人脂蛋白相关磷脂酶A2免疫层析试纸条的制备方法

摘要

本公开公开了一种人脂蛋白相关磷脂酶A2免疫层析试纸条的制备方法，所述免疫层析试纸条包括依次相连接的样品垫、标记抗体垫、抗体包被硝酸纤维素膜和吸收垫；所述标记抗体垫中含有60‑80μg的胶体金或荧光标记的人脂蛋白相关磷脂酶A2的第一单克隆抗体；所述制备方法包括抗体包被硝酸纤维素膜的制备和免疫层析试纸条的组装，本公开所述抗体包被硝酸纤维素膜的制备中使用3‑氨基丙基三乙氧基硅烷，使制备得到的人脂蛋白相关磷脂酶A2免疫层析试纸条的灵敏性提高。

主权项

一种人脂蛋白相关磷脂酶A2免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述免疫层析试纸条包括依次相连接的样品垫、标记抗体垫、抗体包被硝酸纤维素膜和吸收垫；所述标记抗体垫中含有60‑80μg的胶体金或荧光标记的人脂蛋白相关磷脂酶A2的第一单克隆抗体；所述制备方法包括抗体包被硝酸纤维素膜的制备和免疫层析试纸条的组装，所述抗体包被硝酸纤维素膜的制备包括如下步骤：S1.将1‑2mg/mL的人脂蛋白相关磷脂酶A2的第二单克隆抗体溶液和0.3‑0.7％(W/V)的3‑氨基丙基三乙氧基硅烷磷酸盐缓冲液按照体积比1：(4‑6)混合均匀，得到3‑氨基丙基三乙氧基硅烷/抗体包被溶液；S2.使用浓度为0.01‑0.03M且pH值为7.1‑7.6的磷酸盐缓冲液稀释兔抗鼠IgG至0.5‑1.0mg/mL，得到兔抗鼠IgG磷酸盐缓冲液；S3.将3‑氨基丙基三乙氧基硅烷/抗体包被溶液使用定点喷膜仪均匀喷雾于硝酸纤维素膜上的一处作为检测线，并且将兔抗鼠IgG磷酸盐缓冲液使用定点喷膜仪均匀喷雾于硝酸纤维素膜上的另一处作为质控线，检测线与质控线之间间隔0.5cm‑1.0cm，随后置于36‑38℃烘干1.5‑2.5h，得到烘干后的硝酸纤维素膜；S4.烘干后的硝酸纤维素膜在室温下依次置于0.01‑0.03M且pH值为7.1‑7.6的磷酸盐缓冲液、含有0.4‑0.6％(W/V)牛血清白蛋白和3‑5％(W/V)蔗糖的磷酸盐缓冲液、双蒸水中处理，处理完成后于36‑38℃通风干燥100‑140min，得到抗体包被硝酸纤维素膜。