[发明专利]一种应用羊角月牙藻测试采油废水生物毒性的方法

摘要

本发明公开了一种应用羊角月牙藻测试采油废水生物毒性的方法。以采油废水为测试废水，以羊角月牙藻为测试生物，以96孔微孔板为载体；通过96孔微孔板加样分析方法，加样96h后采用多功能酶标仪测试681nm处羊角月牙藻的吸光值；利用实验组与对照组的吸光值来计算羊角月牙藻的生长抑制率，使用毒性单位分级评价法，判断采油废水的生物毒性。本发明方法操作简单，方便快捷，重现性好，能够广泛适用于测试采油废水的毒性。

主权项

1.一种应用羊角月牙藻测试采油废水生物毒性的方法，其特征在于具体步骤为：(1)将采回的浑浊采油废水用0.45μm滤膜过滤，制得处理后的采油废水，然后置于4℃冰箱保存待用，假设处理后的采油废水的浓度为单位1；(2)培养羊角月牙藻使其达到对数生长期，得到羊角月牙藻藻液，将其作为工作藻液；(3)将工作藻液加入到预先设置好采油废水浓度梯度的白色透明96孔微孔板中，制作采油废水和工作藻液的反应体系，每孔总体积为200μL，实验孔每孔含100μL工作藻液和100μL不同浓度的采油废水，空白对照孔每孔含100μL工作藻液和100μL超纯水，为防止产生边缘效应，周边孔每孔含200μL超纯水，相同条件下，每个采油废水浓度进行9次重复实验，并取平均值；(4)96h后，采用多功能酶标仪测试在波长681nm下羊角月牙藻的吸光值RLU，利用实验组与对照组的吸光值来计算羊角月牙藻的生长抑制率，以采油废水的不同浓度为横坐标，以不同浓度对应的生长抑制率为纵坐标，利用Origin9.0中的Logistic函数对不同浓度采油废水与生长抑制率E进行非线性拟合；式中：I0为空白对照样的RLU平均值，I为各浓度9次平行样的RLU平均值；最后，利用毒性单位分级评价法，判断采油废水的综合毒性大小；所述毒性单位分级评价法是指在毒性测试的基础上，将测试结果的EC50转换成TU值以评价废水的毒性大小，具体如下：则毒性等级和生物毒性分级标准为：当TU＜0.4，毒性等级为1，毒性级别为微毒或无毒，污染级别为基本无污染；当0.4≤TU＜1，毒性等级为2，毒性级别为低毒，污染级别为轻污染；当1≤TU＜10，毒性等级为3，毒性级别为中毒，污染级别为中污染；当10≤TU＜100，毒性等级为4，毒性级别为高毒，污染级别为重污染；当TU≥100，毒性等级为5，毒性级别为剧毒，污染级别为严重污染。