[发明专利]一种自然粒度下土壤氮分级方法

摘要

本发明公开了一种自然粒度下土壤氮分级方法，具体步骤为，1）采用去离子水提取土壤样品中游离态氮FN；2）再采用氯化钾KCl提取土壤样品中离子交换态氮IEN；3）再采用醋酸钠‑醋酸缓冲液和氢氧化钠NaOH分别提取土壤样品中碳酸盐结合态氮CN和铁锰氧化态氮IMON；4）再采用盐酸HCl提取土壤样品中的酸解态氮HN；5）最后用碱性过硫酸钾消解‑紫外分光光度计法测定残留态氮RN。本方法对自然粒度下土壤中氮的分级进行了细化，分级更加科学和全面，通过不同化学提取剂的选择和提取顺序保证了分级的准确与可靠。

主权项

1.一种自然粒度下土壤氮分级方法，其特征在于：本方法先采集新鲜的土样样品，然后用化学提取剂逐级提取，即利用不同的化学试剂对自然粒度下土壤样品中氮的赋存形态进行提取，具体步骤如下：1）采用去离子水提取土壤样品中游离态氮FN，包括游离态总氮FTN、可溶性总氮DTN、游离态氨氮F‑NH₄⁺、游离态硝氮F‑NO₃^‑、游离态颗粒氮FPN及可溶性有机氮DON；2）在步骤1）提取后的土壤样品中再采用氯化钾KCl提取土壤样品中离子交换态氮IEN，包括离子交换态总氮IETN、离子交换态氨氮IE‑NH₄⁺、离子交换态硝氮IE‑NO₃^‑、离子交换态有机氮IEON；3）在步骤2）提取后的土壤样品中再采用醋酸钠‑醋酸缓冲液和氢氧化钠NaOH分别提取土壤样品中碳酸盐结合态氮CN和铁锰氧化态氮IMON；4）在步骤3）提取后的土壤样品中再采用盐酸HCl提取土壤样品中的酸解态氮HN，包括酸解总氮HTN、酸解铵态氮AN、酸解氨基酸态氮AAN、酸解氨基糖态氮ASN和酸解未知态氮UAN；5）在步骤4）提取后的土壤样品中用碱性过硫酸钾消解‑紫外分光光度计法测定残留态氮RN；所述各步骤具体为，（1）称取新鲜土样6.0‑8.0g作为土壤样品，置于100ml离心管中，加入50ml去离子水，在300r、20‑25℃下振荡2h，然后在3500 r/min下离心8min，形成上清液A；吸取上清液A 5‑10ml,采用碱性过硫酸钾氧化‑紫外分光光度法测定游离态总氮FTN；剩余上清液A用0.45um的滤膜抽滤，形成滤液B；分别吸取滤液B三份，每份 5‑10ml，其中一份采用纳氏试剂比色法测定可溶性总氮DTN；另一份采用纳氏试剂比色法测定游离态氨氮F‑NH₄⁺；第三份采用紫外分光光度法测定游离态硝氮F‑NO₃^‑；游离态颗粒氮FPN和可溶性有机氮DON 则采用差减法求得，即FPN=FTN－DTN，DON=DTN－（F‑NH₄⁺＋F‑NO₃^‑）；(2) 向上述步骤（1）离心后的土壤残渣加入50ml 2mol L^‑1的氯化钾KCl溶液，在300r、20‑25℃下振荡3h，然后在3500 r/min下离心8min，形成上清液B；分别吸取上清液B 三份，每份10‑15ml，其中一份采用碱性过硫酸钾氧化‑紫外分光光度法测定离子交换态总氮IETN；另一份采用纳氏试剂比色法测定离子交换态氨氮IE‑NH₄⁺；第三份采用紫外分光光度法测定离子交换态硝氮IE‑NO₃^‑；离子交换态有机氮IEON则采用差减法求得，即IEON=IETN－（IE‑NH₄⁺＋IE‑NO₃^‑）；（3）将步骤（2）KCl浸提后的土壤残渣用饱和NaCl溶液清洗两次后，加入50ml 0.5mol L^‑1且pH=5的醋酸钠‑醋酸缓冲液，在300r、20‑25℃下振荡6h，然后在3500 r/min下离心8min，形成上清液C，用0.5mol L^‑1 NaOH调节上清液C至pH=6.5后定容至100ml，吸取20‑30ml定容液用碱性过硫酸钾氧化‑紫外分光光度法测定碳酸盐结合态氮CN；（4）经步骤（3）醋酸钠‑醋酸缓冲液浸提后的土壤残渣用饱和NaCl溶液清洗两次后，加入50ml 0.1mol L^‑1 NaOH，在300r、20‑25℃下振荡17h，然后在3500 r/min下离心10min，形成上清液D；吸取上清液D 10‑15ml采用碱性过硫酸钾氧化‑紫外分光光度计法测定铁锰氧化态氮IMON；（5）将步骤（4）浸提后的土壤残渣用饱和NaCl溶液清洗两次后，加入25ml 6mol L^‑1的盐酸溶液，在300r、20‑25℃下振荡3h后，转移至50ml耐高温比色管中，在120℃高压锅密封酸解12‑24h，冷却后转移至100ml离心管中，在3500 r/min下离心10min，得上清液E；上清液E倒入烧杯中，用1mol L^‑1 NaOH调至pH=6.5，并定容至100ml后，过滤，形成待测液E；吸取待测液E四份，每份 10‑15ml，其中一份采用碱性过硫酸钾氧化‑紫外分光光度计法测定酸解总氮HTN；第二份采用纳氏试剂比色法测定酸解铵态氮AN；第三份采用茚三酮比色法测定酸解氨基酸态氮AAN；第四份采用Elson‑Morgen法测定酸解氨基糖态氮ASN；酸解未知态氮UAN则采用差减法求得，即：UAN=HTN－(AN＋AAN＋ASN)；（6）将步骤（5）酸解后的土壤残渣用饱和NaCl溶液清洗两次后，加入25ml 4%碱性过硫酸钾溶液，在300r、20‑25℃下振荡3h，然后转移至50ml耐高温比色管中于120℃消煮1h，冷却至室温后定容至50ml，将定容液过滤后滤液采用紫外分光光度法测定残留态氮RN。