[发明专利]一种采用双荧光标记方法的21个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒

摘要

本发明公开一种采用双荧光标记方法的21个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒，包括：21对特异性引物的复合引物组、复合扩增21个基因座、反应混合液以及热启动Taq酶；标记引物5’端第一个碱基用常规染料标记，引物5’和3’中间某个碱基用短激发波长荧光染料标记，以实现荧光能量转移。本发明的扩增结果更加稳定均衡，同时具有更高的灵敏度，可广泛应用于中国人群的个体识别、DNA建库和亲子鉴定，适用于各类检材。

主权项

1.一种采用双荧光标记方法的21个短串联重复序列复合扩增检测试剂盒，其特征在于，包括：用于复合扩增21个基因座的21对特异性引物构成的复合引物组、反应混合液以及热启动Taq酶；被复合扩增的21个基因座为Amelogenin，D3S1358，vWA，D7S820，CSF1PO，D8S1179，D21S11，D16S539，TH01，D13S317，TPOX，D18S51，D5S818，FGA，D2S1338，D19S433，D1S1656，D12S391，Penta D，Penta E和D6S1043；所述反应混合液的组成为：MgCl₂ 5mM、Tris‑HCl 125mM pH8.3 25℃，KCl 125mM，dNTPs 0.5mM，BSA 1.5g/L；所述dNTPs为dATP、dTTP、dCTP、dGTP的等摩尔混合物；所述用于扩增21个基因座的21对特异性引物的序列为SEQ ID NO.01‑SEQ ID NO.42；所述被复合扩增的21个基因座中，各基因座采用分别位于该基因座核心重复区两侧的一对引物扩增，其中每对引物中有一条引物采用双荧光染料标记方法进行标记；所述用于扩增21个基因座的21对特异性引物分为四组采用双荧光染料标记方法进行标记；所述四组包括第一组引物组：用于扩增基因座D3S1358的引物对SEQ ID NO.01‑SEQ ID NO.02，用于扩增基因座vWA的引物对SEQ ID NO.03‑SEQ ID NO.04，用于扩增基因座D7S820的引物对SEQ ID NO.05‑SEQ ID NO.06，用于扩增基因座CSF1PO的引物对SEQ ID NO.07‑SEQ ID NO.08，用于扩增基因座PentaE的引物对SEQ ID NO.09‑SEQ ID NO.10；第二组引物组：用于扩增基因座D8S1179的引物对SEQ ID NO.11‑SEQ ID NO.12，用于扩增基因座D21S11的引物对SEQ ID NO.13‑SEQ ID NO.14，用于扩增基因座D16S539的引物对SEQ ID NO.15‑SEQ ID NO.16，用于扩增基因座D2S1338的引物对SEQ ID NO.17‑SEQ ID NO.18，用于扩增基因座Penta D的引物对SEQ ID NO.19‑SEQ ID NO.20；第三组引物组：用于扩增基因座D19S433的引物对SEQ ID NO.21‑SEQ ID NO.22，用于扩增基因座TH01的引物对SEQ ID NO.23‑SEQ ID NO.24，用于扩增基因座D13S317的引物对SEQ ID NO.25‑SEQ ID NO.26，用于扩增基因座TPOX的引物对SEQ ID NO.27‑SEQ ID NO.28，用于扩增基因座D18S51的引物对SEQ ID NO.29‑SEQ ID NO.30，用于扩增基因座D6S1043的引物对SEQ ID NO.31‑SEQ ID NO.32；第四组引物组：用于扩增基因座Amelogenin的引物对SEQ ID NO.33‑SEQ ID NO.34，用于扩增基因座D1S1656的引物对SEQ ID NO.35‑SEQ ID NO.36，用于扩增基因座D5S818的引物对SEQ ID NO.37‑SEQ ID NO.38，用于扩增基因座D12S391的引物对SEQ ID NO.39‑SEQ ID NO.40，用于扩增基因座FGA的引物对SEQ ID NO.41‑SEQ ID NO.42；第一组引物组中采用双荧光染料标记方法进行标记的引物的5’端第一个碱基用FAM进行标记，5’端第6位的碱基用FAM进行标记；第二组引物组中采用双荧光染料标记方法进行标记的引物的5’端第一个碱基用HEX进行标记，5’端第6位的碱基用HEX进行标记；第三组引物组中采用双荧光染料标记方法进行标记的引物的5’端第一个碱基用TAMRA进行标记，5’端第6位的碱基用FAM进行标记；第四组引物组中采用双荧光染料标记方法进行标记的引物的5’端第一个碱基用ROX进行标记，5’端第6位的碱基用FAM进行标记。