[发明专利]一种凝集素‑磁小体复合物的制备方法

摘要

一种凝集素‑磁小体复合物的制备方法，包括以下步骤即将菌体以1∶10(M∶V)的比例悬浮于1PBS缓冲液中，用高压均质机(压力120~140MPa)破碎3~4次后，放入磁场中，磁性分离磁小体；本发明所述方法制备凝集素‑磁小体复合物，改造后的PE‑磁小体较改造前的磁小体分散性更好，偶联凝集素更多，制备的WGAPE‑磁小体，能很好地分离目的糖蛋白，同时避免了磁小体自身蛋白对糖蛋白分离特异性的影响。

主权项

一种凝集素‑磁小体复合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）即将菌体以1∶10(M∶V)的比例悬浮于1PBS缓冲液中，用高压均质机(压力120~140MPa)破碎3~4次后，放入磁场中，磁性分离磁小体；（2）将磁小体置于1×PBS缓冲液中，超声清洗5~8次，去离子水清洗3次后，真空冷冻干燥，于‑80℃保存备用；（3）取1mg磁小体于1mL1%SDS溶液中100℃加热5min；（4）磁性分离器收集磁小体，并用4mmol/L磷酸盐(PB，pH值7．5)缓冲液清洗3次；（5）磁小体重新悬浮于1mg/mLPE溶液，100W超声30min，避光孵育2h，磁性分离器收集反应后的磁小体经PB缓冲液清洗3次后备用；（6）磁小体加入1．5mL氯仿/甲醇(V∶V，1∶2)，剧烈振荡后，加入0．5mL氯仿后继续振荡，再加入0．5mL水并剧烈振荡，3000r/min，离心5min，取有机层(下层)于离心管中，N2吹干备用；、分别取1mg磁小体和PE‑磁小体悬浮于1mL1mmol/LBS3溶液中，超声混匀，于37℃，200r/min，反应0.5h，磁性分离器收集反应后产物，去上清，并用PB缓冲液清洗，将上述复合物悬浮于1mL1mg/mLWGA溶液，37℃，200r/min，反应1h，磁性分离器收集并用PB缓冲液清洗后，于5%BSA溶液37℃，200r/min，封闭0.5h后即得。