[发明专利]一种用于检测EGFR基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种用于检测EGFR基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒，包括：E‑18引物组、E‑19引物组、E‑20引物组、E‑21引物组、E‑2引物组、E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针、E‑2检测探针和内标检测探针；E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针和E‑2检测探针的5’端均修饰有第一荧光报告基团，3’端均修饰有第一荧光猝灭基团；内标检测探针的序列与E‑2检测探针的序列相同，其5’端修饰有第二荧光报告基团，3’端均修饰有第二荧光猝灭基团。本发明以人类EGFR基因突变为检测对象，通过特异引物的优化组合以及荧光探针，从而实现准确、简单、快速地同时检测EGFR基因突变，而且检测突变的能力高。

主权项

1.一种用于检测EGFR基因突变的多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括：E‑18引物组、E‑19引物组、E‑20引物组、E‑21引物组、E‑2引物组、E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针、E‑2检测探针和内标检测探针；E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针和E‑2检测探针的5’端均修饰有第一荧光报告基团，3’端均修饰有第一荧光猝灭基团；内标检测探针的序列与E‑2检测探针的序列相同，其5’端修饰有与第一荧光报告基团不同的第二荧光报告基团，3’端均修饰有第二荧光猝灭基团；其中，E‑18引物组由正向引物E‑18‑M1‑F、E‑18‑M2‑F、E‑18‑M3‑F和反向引物E‑18‑R组成，依次如SEQ ID NO 01至04所示；E‑19引物组由正向引物E‑19‑M1‑F、E‑19‑M2‑F、E‑19‑M3‑F、E‑19‑M4‑F、E‑19‑M5‑F、E‑19‑M6‑F、E‑19‑M7‑F、E‑19‑M8‑F、E‑19‑M9‑F、E‑19‑M10‑F、E‑19‑M11‑F、E‑19‑M12‑F、E‑19‑M13‑F、E‑19‑M14‑F、E‑19‑M15‑F、E‑19‑M16‑F、E‑19‑M17‑F、E‑19‑M18‑F、E‑19‑M19‑F和反向引物E‑19‑R组成，依次如SEQ ID NO 05至24所示；E‑20引物组由正向引物E‑20‑M1‑F、E‑20‑M2‑F、E‑20‑M3‑F、E‑20‑M4‑F、E‑20‑M5‑F和反向引物E‑20‑R组成，依次如SEQ ID NO 25至30所示；E‑21引物组由正向引物E‑21‑M1‑F、E‑21‑M2‑F和反向引物E‑21‑R组成，依次如SEQ ID NO 31至33所示；E‑2引物组由正向引物E‑2‑F和反向引物E‑2‑R组成，依次如SEQ ID NO 34和35所示；E‑18检测探针为E‑18‑P，如SEQ ID NO 36所示；E‑19检测探针为E‑19‑P，如SEQ ID NO 37所示；E‑20检测探针为E‑20‑P，如SEQ ID NO 38所示；E‑21检测探针为E‑21‑P，如SEQ ID NO 39所示；E‑2检测探针为E‑2‑P，内标检测探针为E‑2‑I，均如SEQ ID NO 40所示；该多重荧光PCR检测试剂盒的每一反应体系的组成如下：E‑18引物组、E‑19引物组、E‑20引物组和E‑21引物组之一中的一正向引物和一反向引物对应的E‑18检测探针、E‑19检测探针、E‑20检测探针、E‑21检测探针和E‑2检测探针之一E‑2引物组内标检测探针1×PCR缓冲液MgCl₂dNTPsTaq酶H₂ODNA模板；该多重荧光PCR检测试剂盒的每一反应体系的反应条件均为：95 ºC预变性5min，1个循环；95 ºC变性25s，60 ºC退火20s，72 ºC延伸10s，15个循环；95 ºC变性25s，60ºC退火35s，72 ºC延伸10s，30个循环，后30个循环在退火时检测荧光信号。