[发明专利]一种载重组戊肝蛋白微球混悬液制剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种载重组戊肝蛋白微球混悬液制剂的制备方法，混悬液制剂中微球载体为内层为海藻酸盐核芯，外被壳聚糖层的双层微球，称其为海藻酸盐‑壳聚糖微球载体。所制备混悬液制剂中的载重组戊肝蛋白微球的平均粒径分布在6.73微米～8.39微米之间，形态均一。混悬液制剂中重组戊肝蛋白终浓度为60微克/毫升（包括微球载体吸附的重组戊肝蛋白和未吸附游离的重组戊肝蛋白），通过对混悬液外液的重组戊肝蛋白的测定，计算出微球载体对重组戊肝蛋白的吸附率大于90%。载重组戊肝蛋白微球混悬剂较同等剂量以氢氧化铝作为佐剂的重组戊肝疫苗可更好的刺激实验动物产生针对戊肝的免疫反应，这在实际应用中具有较大意义。

主权项

1.一种载重组戊肝蛋白微球混悬液制剂的制备方法，包括以下步骤：1）制备方法为乳化法，浓度为1%～1.5%经115℃高压灭菌30分钟的海藻酸钠水溶液为水相，以液体石蜡为油相，水相与油相体积比为1:2，以单一乳化剂或混合乳化剂作为乳化剂，乳化剂添加量为乳化剂体积/油相体积1%~4%，油水界面平衡值控制在4~6，预乳化转速控制在50转/分钟~500转/分钟，预乳化时间控制在5~30分钟，乳化转速控制在500转/分钟~2000转/分钟，乳化时间控制在5~30分钟，固化剂为经115℃高压灭菌30分钟的氯化钙水溶液，其浓度为5%~20%，固化液与乳液体积比为1:1~1:3，固化液滴入速度为3毫升/分钟~20毫升/分钟，继续固化时间为10~120分钟；海藻酸钙微球经油水相分离后用无菌注射用水或无菌蒸馏水冲洗3~5遍，离心分离，得微球载体海藻酸盐核芯；2）获得的海藻酸盐核芯包被壳聚糖层制备海藻酸盐‑壳聚糖微球载体将步骤1）中获得的海藻酸盐核心悬浮于浓度为0.1%~0.8%经115℃高压灭菌30分钟的壳聚糖水溶液中，在25℃~42℃，转速为50转/分钟~200转/分钟摇床中温育10~60分钟，经1000转/分钟~5000转/分钟离心1~30分钟，无菌注射用水或无菌蒸馏水冲洗3~5次，获得海藻酸盐‑壳聚糖微球载体；3）重组戊肝蛋白微球制剂的制备向步骤2）中获得的海藻酸盐‑壳聚糖微球载体加入重组戊肝蛋白水溶液，并用无菌注射用水定容至与1）中所用的水相相同的体积，使最后抗原蛋白含量在60微克/毫升，在25℃~42℃，转速为50转/分钟~200转/分钟摇床中温育10~60分钟，制备出载戊肝蛋白微球混悬液制剂，混匀后无菌分装，2℃~8℃保存，即得目标产物。