[发明专利]黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：1)、选用黄精叶钩吻的根状茎的不定芽作为外植体；2)、不定芽的消毒；3)、不定芽的启动培养：将消毒后的不定芽剥离外围的叶片后接种到启动培养基上，进行不定芽生长及丛生芽的诱导；4)、不定芽的快速扩增：将步骤3)所得的丛生芽分割成含1新芽的芽丛后转接于增殖培养基上进行培养；5)、不定芽的伸长及生根培养：将步骤4)所得的丛生芽切割成含2～3株为一丛的不定芽丛转移到生根/伸长培养基上进行培养；6)、将步骤5)所得的已生根的植株取出，得可出瓶种植的种苗。

主权项

1.黄精叶钩吻的组培快速繁殖方法，其特征是包括以下步骤：1)、取材：选用黄精叶钩吻的根状茎的不定芽作为外植体；2)、不定芽的消毒：将步骤1)所得的根状茎上的不定芽充分洗涤，然后在超净台上操作，先用75％酒精浸泡处理20～30sec，无菌水冲洗后，用含0.1％升汞灭菌8～10min，无菌水冲洗3～5次；3)、不定芽的启动培养：将消毒后的不定芽剥离外围的叶片后接种到启动培养基上，进行不定芽生长及丛生芽的诱导；所述启动培养基为MS+BA0.6～3mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20～30g/l+琼脂5～8g/l，pH为5.6～5.8；诱导培养条件为：16小时光照，光照强度30～45μmolm‑2s‑1，温度为25±1℃；8小时暗培养，温度为21±1℃；上述光照和暗培养交替进行；当启动培养基上的不定芽的基部出现至少3个丛生芽时，结束启动培养；4)、不定芽的快速扩增：将步骤3)所得的丛生芽分割成含1新芽的芽丛后转接于增殖培养基上进行培养，增殖培养基为MS+BA 0.6～3mg/L+NAA 0.2～0.5mg/L+KT 0～1.0mg/L+2,4‑D 0～0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20～30g/L+琼脂5～8g/L，pH为5.6～5.8；培养条件为：16小时光照，光照强度30～45μmolm‑2s‑1，温度为25±1℃；8小时暗培养，温度为21±1℃；上述光照和暗培养交替进行；待增殖培养基上的新芽至少长出3个丛生芽时，结束此步骤的培养；5)、不定芽的伸长及生根培养：将步骤4)所得的丛生芽切割成含2～3株为一丛的不定芽丛转移到生根/伸长培养基上进行培养，生根/伸长培养基为MS+BA0.6mg/L+NAA0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20～30g/L+琼脂5～8g/L，pH为5.6～5.8；培养条件为：16小时光照，光照强度30～45μmoLm‑2s‑1，温度为25±1℃；8小时暗培养，温度为20±1℃；上述光照和暗培养交替进行；当不定芽丛长到4.0～6.0cm高、且基部有至少5条根时，结束此步骤的培养；6)、将步骤5)所得的已生根的植株取出，得可出瓶种植的种苗。