[发明专利]一种基于cHS4元件的哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用有效
| 申请号： | 201611111154.3 | 申请日： | 2016-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN106544362B | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 赵春澎;王天云;王小引;张玺;徐光华;付笑笑;高向征;白可可 | 申请（专利权）人： | 新乡医学院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 张鹏辉 |
| 地址： | 453003*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于cHS4元件的哺乳动物细胞附着体表达载体、表达系统、制备方法和应用，属于基因工程与基因治疗技术领域。鸡超敏感位点4(cHS4)是一种经典绝缘子元件，具有増强子阻断与异染色质屏障的功能，能将转基因沉默的主要原因‑位置效应降到最低，还能降低外源启动子及增强子造成邻近基因异常表达的概率。本发明将cHS4序列引入载体的多克隆位点即eGFP下游处，一方面能克服转基因沉默，另一方面还能介导外源基因在无选择压力的情况下在哺乳动物细胞中稳定、高效、持久的表达，且安全性较好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 chs4 元件 哺乳动物 细胞 附着 体表 载体 表达 系统 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.附着体表达载体，其特征在于：该载体上插入有如SEQ ID NO:1所示的序列；所述附着体表达载体由包括如下步骤的方法制得：1）合成cHS4序列在序列SEQ ID NO:1的5’端引入BsrG I酶切位点，3’端引入BspE I酶切位点，然后在序列两端分别加上15bp以上待插入载体的待插入位点附近的同源序列，得到cHS4序列；2）pES4质粒载体的构建将pEGFP‑C1质粒用BspE I单酶切，凝胶回收酶切后的pEGFP‑C1线性质粒DNA，与上述cHS4序列连接，转化、鉴定，得到载体pES4。
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