[发明专利]一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法，包括以下步骤：外植体的选择，外植体的低温预处理，外植体的表面消毒，愈伤组织诱导培养，愈伤组织的增殖培养，愈伤组织的分化，不定芽的伸长，不定芽的生根。本发明的优点在于：提供了一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法，具体涉及一种以木本能源植物乌桕的花药为外植体，通过愈伤组织的诱导、增殖和分化，最终获得乌桕完整植株的方法。本发明的优点在于：建立了一套适合乌桕的简单、快速、稳定的花药离体再生体系，为乌桕的单倍体育种、遗传图谱的构建及后期种质资源的创建等提供技术支撑，同时，对乌桕的遗传改良和新品种的选育具有重要意义。

主权项

1.一种通过花药培养获得乌桕再生植株的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体的选择选取生长至适宜时期的乌桕花序用于后续培养；(2)外植体的低温预处理将花序装于自封塑料袋内置于冰箱进行低温预处理；(3)外植体的表面消毒将经过低温预处理后的花序经流水冲洗后置于无菌操作台中进行表面消毒；(4)愈伤组织诱导培养滤纸吸干步骤(3)中消毒后花序表面的水分，剥取花药，接种于愈伤组织诱导培养基中，再经过3‑4周的光照培养，获取愈伤组织；其中，愈伤组织诱导培养基具体为添加有0.6‑3.0mg/L TDZ和0.6‑3.0mg/L IAA的DKW培养基；(5)愈伤组织的增殖培养将步骤(4)中获得的愈伤组织转接于增殖培养基中进行增殖培养；其中，增殖培养基具体为添加有0.1‑0.5mg/L TDZ和1.0‑2.0mg/L IAA的DKW培养基；(6)愈伤组织的分化将步骤(5)中增殖后的愈伤组织切成切块，转接于分化培养基中进行愈伤组织的分化培养；其中，分化培养基具体为添加有0.2‑0.5mg/L TDZ和0.1‑0.5mg/L ZT的DKW培养基；(7)不定芽的伸长将步骤(6)中已分化出丛生芽的愈伤组织，转接于不定芽伸长培养基中进行不定芽的伸长培养并获取相应乌桕幼苗；其中，不定芽伸长培养基具体为添加有0.05‑0.2mg/L ZT的1/2DKW培养基；(8)不定芽的生根将步骤(7)中伸长的乌桕幼苗转接于生根培养基中进行生根培养，最终获得乌桕再生植株；其中，生根培养基具体为添加有0.1‑2.0mg/L亚精胺的1/2DKW培养基。