[发明专利]一种脱细胞生物羊膜的制备方法

摘要

本发明提供了一种脱细胞生物羊膜的制备方法，包括羊膜的清洗、化学处理和冷冻干燥。该方法是将新鲜羊膜用生理盐水清洗干净，洗去羊膜上的残留血液，再一次用过氧化氢、丙酮、十二烷基硫酸钠、酒精处理后，在‑70℃下的环境中深低温冷冻16‑25小时，然后将其放入冷冻干燥机中，按照设定好的冻干曲线进行冷冻干燥。辐照灭菌后得到脱细胞生物羊膜的成品。本发明使用过氧化氢、丙酮、十二烷基硫酸钠、酒精联合处理羊膜，可以有效地除去羊膜中的上皮细胞层、纤维膜细胞层和海绵层具有免疫原性的成分，同时保留了其基底膜和致密层，较好的保留了羊膜的生物活性和生物力学性能；另一方面通过冷冻干燥处理可以进一步的减少脱细胞生物羊膜的免疫原性，降低宿主细胞的免疫排斥反应。另外，本发明设计的脱细胞生物羊膜的制备方法简单易行，方便规模化生产操作。

主权项

一种脱细胞生物羊膜的制备方法，包括羊膜的清洗、化学处理和冷冻干燥，其特征在于，该方法按以下步骤进行：（1）将新鲜羊膜用生理盐水反复清洗，直至无残留血液；（2）将步骤（1）所得的羊膜用体积质量比为5‑8:1比例的过氧化氢溶液浸泡2小时；（3）将步骤（2）所得的羊膜用体积质量比为5‑8:1比例的分析纯的丙酮浸泡，水浴恒温震荡脱去脂肪成分；（4）将步骤（3）所得的羊膜用体积质量比为5‑8:1比例的十二烷基硫酸钠溶液浸泡16‑20小时；（5）将步骤（4）所得的羊膜用体积质量比为5‑8:1比例的酒精浸泡16‑20小时；（6）将步骤（5）所得的羊膜用大量纯化水反复清洗至末道清洗液pH值为6.5‑7.5；（7）将步骤（6）所得的羊膜放入‑70℃下的环境中冷冻16‑25小时；（8）将步骤（7）所得的羊膜放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥；（9）将步骤（8）所得的羊膜进行辐照灭菌。