[发明专利]一种DNA聚合酶的固定化方法及其应用有效
| 申请号： | 201611091767.5 | 申请日： | 2016-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN108130317B | 公开（公告）日： | 2020-05-26 |
| 发明（设计）人： | 车团结;徐进章;赵芳 | 申请（专利权）人： | 苏州百源基因技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N11/02;C12N11/10;C12P19/34 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 张倩倩;李敏 |
| 地址： | 215163 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于酶工程领域，具体涉及一种DNA聚合酶的固定化方法及其应用。该固定化方法，包括以下步骤：先制得改性壳聚糖水溶液，再制得DNA聚合酶的吸附反应液，再制得DNA聚合酶的交联反应液，再与木浆海绵进行混合，加入角叉菜胶水溶液、离心、洗涤，最后冷冻干燥，即得固定化的DNA聚合酶，使得制得的固定化的DNA聚合酶的活力较高，热稳定性较好；通过选择特定的蛋白絮凝剂、特定的吸附反应条件、特定的交联反应条件、特定的交联剂、特定的缓冲液、特定的载体、特定的PCR反应促进剂和特定的冷冻干燥条件，使得制得的固定化的DNA聚合酶的活力最高，热稳定性最好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 dna 聚合 固定 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种DNA聚合酶的固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：将改性壳聚糖加入至水中，加热溶解，湿热灭菌，冷却，得改性壳聚糖水溶液；将DNA聚合酶加入至所述改性壳聚糖水溶液中，进行吸附反应，得DNA聚合酶的吸附反应液；将双醛葡聚糖水溶液加入至所述DNA聚合酶的吸附反应液中，进行交联反应，然后加入至氯化钾溶液中，静置，然后用缓冲液进行洗涤，得DNA聚合酶的交联反应液；将所述DNA聚合酶的交联反应液与木浆海绵进行混合，加入角叉菜胶水溶液，离心，然后用缓冲液进行洗涤，至洗涤液中检测不出游离的DNA聚合酶；冷冻干燥，即得固定化的DNA聚合酶。
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