[发明专利]一种聚乙烯醚苯胺双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术

摘要

一种聚乙烯醚苯胺双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，属于药物分离技术领域。本发明步骤为聚乙烯醚苯胺的制备；两相萃取藻蓝蛋白；在浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉；蛋白回收率可达70～95％。该方法简单，对螺旋藻破壁液直接使用聚乙烯醚苯胺进行富集分离，简化了纯化过程的步骤，选择性高，分离得到的藻蓝蛋白的光谱纯度达到A620/A280>3.5。原料可采用螺旋藻鲜藻或干藻粉，从而提供了一种解决螺旋藻资源高值规模化利用的技术方法。

主权项

一种聚乙烯醚苯胺双水相萃取螺旋藻藻蓝蛋白的分离技术，其特征在于步骤为：聚乙烯醚苯胺的制备；两相萃取藻蓝蛋白；经浓缩和冷冻干燥后获得藻蓝蛋白粉。(1)聚乙烯醚苯胺的制备：在圆底烧瓶中放入100g聚乙二醇，恒压漏斗中装入三溴化磷，三溴化磷与聚乙二醇的重量比为1:2～3，在磁力搅拌下将三溴化磷缓慢滴入圆底烧瓶中，滴加时间为0.5小时，滴加完毕后，升温至60～90℃反应5～8小时，在反应混合物中缓慢滴入去离子水，直至烧瓶中的黄色蒸气消除，然后在反应混合物中加入500～1000ml二氯甲烷，转移至分液漏斗中，用250ml的25％碳酸钠水溶液洗涤三次，收集下层液体，将下层溶液蒸馏去除二氯甲烷后得到溴代聚乙烯醚。在溴代聚乙烯醚中，加入苯胺和绝对无水乙醇，苯胺与溴代聚乙烯醚之间重量比为1:5～9，绝对无水乙醇与溴代聚乙烯醚之间重量比为1:0.2～0.5，加热回流反应20～26小时，然后在反应物中加入15～22g活性炭搅拌0.5～2小时，过滤后将滤液在4℃下结晶12小时，然后过滤获得聚乙烯苯胺。(2)两相萃取：在螺旋藻破壁清液中加入聚乙烯苯胺和无机盐，聚乙烯醚苯胺:无机盐:破壁清液的重量比为0.05～0.5:0.1～0.25:1，震荡混合2分钟，静置分相，藻蓝蛋白富集于上相。(3)将上述含藻蓝蛋白的上相经截留分子量为30000道尔顿的超滤膜过滤，去除聚乙烯醚苯胺和无机盐，获得藻蓝蛋白水溶液，纯度为3.5～4.2，蛋白浓度为6.92～10.23mg/ml。(4)将藻蓝蛋白水溶液在30～60℃下真空浓缩至原体积三分之一，冷冻干燥后得到藻蓝蛋白粉末。