[发明专利]一种体外长期稳定培养鸡胚胎干细胞的方法有效
| 申请号： | 201611062175.0 | 申请日： | 2016-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN106701662B | 公开（公告）日： | 2019-09-27 |
| 发明（设计）人： | 韩红兵;伍椰南;张力 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;白艳 |
| 地址： | 100094 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体外长期稳定培养鸡胚胎干细胞的方法。本发明提供了鸡胚胎干细胞的体外培养基，为在基础培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、干细胞因子和白血病抑制因子得到的培养基；所述碱性成纤维细胞生长因子、所述干细胞因子和所述白血病抑制因子在所述体外培养基的配比为1:1:1。本发明首次利用可传代的鸡胚成纤维细胞系DF‑1细胞系作为饲养层，通过外源添加人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF),重组小鼠干细胞因子(mSCF)和人白血病抑制因子(hLIF)三种细胞因子，从而可以实现在体外长期、稳定培养鸡胚胎干细胞且维持其自我更新能力。 | ||
| 搜索关键词： | 鸡胚胎干细胞 干细胞因子 碱性成纤维细胞生长因子 白血病抑制因子 体外培养基 长期稳定 种体 人碱性成纤维细胞生长因子 成纤维细胞系 传代 基础培养基 人白血病 细胞因子 抑制因子 重组小鼠 自我更新 培养基 配比为 饲养层 鸡胚 体外 外源 | ||
【主权项】：
1.鸡胚胎干细胞的体外培养试剂盒，包括鸡胚胎干细胞的体外培养基和鸡胚成纤维细胞系DF‑1；所述鸡胚胎干细胞的体外培养基，为在基础培养基中添加碱性成纤维细胞生长因子、干细胞因子和白血病抑制因子得到的培养基；所述碱性成纤维细胞生长因子和所述白血病抑制因子分别为人源碱性成纤维细胞生长因子和人源白血病抑制因子；所述干细胞因子为小鼠干细胞因子；所述碱性成纤维细胞生长因子在所述体外培养基中的终浓度为20 ng/ml；所述干细胞因子在所述体外培养基中的终浓度为20 ng/ml；所述白血病抑制因子在所述体外培养基中的终浓度为20 ng/ml；所述基础培养基为培养动物干细胞的培养基；所述培养动物干细胞的培养基具体由高糖DMEM、浓度为2mM谷氨酰胺，浓度为1mM丙酮酸钠，浓度为0.16mM β‑巯基乙醇，浓度为100U/ml 链霉素、浓度为100U/ml青霉素及质量百分含量为5%胎牛血清组成。
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