[发明专利]法尼醇X受体的新配体及其筛选方法和应用

摘要

本发明涉及一种法尼醇X受体的新配体及其筛选方法和应用。本发明首次利用核磁共振检测，通过记录、分析饱和传递差异和WaterLOGSY两种核磁共振谱图，在小分子片段筛选得到了11种FXR的新配体。再通过Alphascreen实验进一步测定筛选得到体外活性更好的FXR的配体。将这11种小分子化合物扩展应用到ERRγ上，筛选得到与ERRγ蛋白质亲和性好的小分子化合物，并据此衍生得到亲和力更高的6‑硝基吲哚化合物。本发明筛选得到的新配体及其衍生物，可通过进一步的分子优化来制备全新结构的FXR调节剂和ERRγ调节剂，为治疗与FXR相关的疾病或者与ERRγ相关的疾病提供新的有效药物。

主权项

1.一种法尼醇X受体的配体筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)首次筛选：配制FXR-LBD蛋白样品溶液：用缓冲溶液以及D2O配制FXR-LBD蛋白样品溶液，所述FXR-LBD蛋白样品溶液中FXR-LBD蛋白的浓度为5-15μM的；配制小分子化合物的混合溶液：将待筛选的小分子化合物编组，每组5-15个，每组小分子化合物共同溶解于DMSO-d6中，每个小分子化合物的浓度为15-25mM，即得各组小分子化合物的混合溶液；配制核磁样品溶液：移取蛋白样品溶液至塑料管中，每管480-490μL；然后在每管中分别加入1组小分子化合物的混合溶液，每管10-20μL；混匀、静置或离心，即得所述核磁样品溶液；核磁共振检测：将所述核磁样品溶液转移至核磁管中，依次进行核磁共振检测，采集一维氢谱；(2)二次筛选：二次筛选时每管核磁样品溶液中只含1-2个化合物，其它条件与首次筛选的条件相同，检查每个化合物的谱图，确认STD和WaterLOGSY都出峰的小分子化合物，二次筛选得到的小分子化合物即为法尼醇X受体的小分子配体，其结构如下：