[发明专利]一种拟南芥管状分子体外诱导培养的方法有效
| 申请号： | 201611019431.8 | 申请日： | 2016-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN106613965B | 公开（公告）日： | 2018-08-10 |
| 发明（设计）人： | 蒋苏;李师鹏;曹子谊;赵淑举;刘振东;白如水 | 申请（专利权）人： | 齐鲁师范学院 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 济南千慧专利事务所(普通合伙企业) 37232 | 代理人： | 王宽 |
| 地址： | 250200*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种拟南芥管状分子体外诱导培养的方法，步骤如下：(1)制备拟南芥愈伤组织；(2)在愈伤组织增殖培养基上对拟南芥愈伤组织进行扩繁培养；(3)将扩繁后的拟南芥愈伤组织进行悬浮培养，获得分散性良好的拟南芥愈伤组织悬浮培养系；(4)将拟南芥愈伤组织悬浮培养系采用细胞筛进行过滤，过滤后的单细胞培养系转入拟南芥管状分子体外诱导液体培养基中，进行诱导培养，诱导拟南芥愈伤组织单细胞进行分化，在体外形成管状分子。本发明的方法在拟南芥材料上适用范围更广泛、取材更简易、培养时间缩短、获得细胞分散性更好。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 拟南芥 管状 分子 体外 诱导 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种拟南芥管状分子体外诱导培养的方法，其特征在于，步骤如下：(1)制备拟南芥愈伤组织；制备方法为：将萌发后10～14天苗龄拟南芥幼苗整株切碎接入愈伤组织诱导培养基中，23～25℃暗培养，14～16天继代一次，共诱导培养28～32天，获得拟南芥愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基是在B5基本培养基中添加20g/L的蔗糖、0.5mg/L的2,4‑D，0.05mg/L的6‑BA，6～8g/L的琼脂，调节pH为5.8；(2)在愈伤组织增殖培养基上对拟南芥愈伤组织进行扩繁培养；所述愈伤组织增殖培养基是在MS基本培养基中添加30g/L的蔗糖、1mg/L的2,4‑D，6～8g/L的琼脂，调节pH为5.8；所述扩繁培养采用的条件为：23～25℃暗培养，15～20天继代一次，共培养30～40天；(3)将扩繁后的拟南芥愈伤组织进行悬浮培养，获得分散性良好的拟南芥愈伤组织悬浮培养系；悬浮培养采用的条件为：将扩繁后的拟南芥愈伤组织接种于MS液体培养基中，23～25℃，以180rpm转速进行振荡，暗培养，2～3天继代一次，共培养6～9天；(4)将拟南芥愈伤组织悬浮培养系采用细胞筛进行过滤，过滤后的单细胞培养系转入拟南芥管状分子体外诱导液体培养基中，进行诱导培养，诱导拟南芥愈伤组织单细胞进行分化，在体外形成管状分子；所述拟南芥管状分子体外诱导液体培养基是在MS基本培养基中添加30g/L的蔗糖、6mg/L的NAA，1mg/L的6‑BA，6μM的24‑表油菜素内酯，调节pH为5.8。
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