[发明专利]一种PRRSV、SIV、猪HEV抗体的液相芯片多重检测试剂盒

摘要

本发明提供了一种猪PRRSV、SIV、HEV抗体的液相芯片多重检测试剂盒；以PRRSV nsp7、SIV HA、HEV ORF2的不同荧光标记微球为载体，在PRRSV、SIV、HEV抗体单一液相芯片检测方法基础上，建立同时检测3种抗体的多重液相芯片检测方法，为HEV、PRRSV、SIV抗体监测提供一种更有效、更快速的检测方法，同时为猪病鉴别诊断及其他动物疫病抗体的血清检测新方法的建立提供新的线索；针对我国养猪业快速发展、猪病情况复杂、混合感染现象严重等养殖现状，进一步加强对猪群疫病情况进行准确、快速、有效的诊断和监测。

主权项

一组用于检测猪戊型肝炎病毒、猪流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的羧基化荧光微球组，其特征在于，所述羧基化荧光微球组分别由用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的羧基化荧光微球61‑Nsp7、用于检测猪流感病毒的羧基化微球46‑HA和用于检测猪戊型肝炎病毒的羧基化荧光微球12‑ORF2组成；所述羧基化荧光微球61‑Nsp7是第61号羧基化荧光微球和PRRSV‑nsp7重组蛋白偶联获得；所述羧基化微球46‑HA是第46号羧基化荧光微球和SIV HA重组蛋白偶联获得；所述羧基化荧光微球12‑ORF2是第12号羧基化荧光微球和HEV ORF2重组蛋白偶联获得；其中，SIV HA重组蛋白的制备方法包括以下步骤：S11. 去除表达HA基因的信号肽的基因序列，利用HA‑F和HA‑R引物扩增HA基因；其中，HA‑F和HA‑R引物的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；S12. 连接pMAL‑c5X载体，获得pMAL‑cHA重组质粒，转入原核表达菌诱导表达即可；其中，HEV ORF2重组蛋白的制备方法包括以下步骤：S21. 以表达HEV ORF2 C段第337个到第645个氨基酸片段的核苷酸序列为目的片段，利用上游引物F和下游引物R扩增该目的片段；上游引物F和下游引物R的序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；S22. 连接pMAL‑c5X载体，获得pMAL‑c5X‑ORF2重组质粒，转入原核表达菌诱导表达即可；其中，S12所述诱导表达条件为：IPTG 0.3mM，温度37℃，时间2小时；S22所述诱导表达条件为：IPTG终浓度0.8 mmol/L，温度30℃，时间5h。