[发明专利]一种适用于甜菊花药培养的花药分离方法

摘要

本发明方法公开一种适用于甜菊花药培养的花药分离方法，属于植物组织培养技术领域。该方法主要技术是在甜菊植物花蕾期采集适宜大小的头状花序，在无菌条件下先将花序用75％乙醇消毒30秒后，1％升汞浸泡3‑4分钟，再用无菌水清洗3‑4次，然后将花序放置于铺有无菌滤纸的培养皿中晾干，用小镊子从花序中拔取花蕾，并将其置于左手食指指腹上，右手持解剖针刺破花蕾的花冠顶部，再用解剖针针尖从花冠基部向顶部滚动式挤压，花药即可被挤出且保持完整，所得花药可直接用于离体培养。本发明方法首次公开从长约2毫米的甜菊微小花蕾中分离花药的操作方法，简单、快速且能保持花药完整，提高了分离成功率，并有效降低了花药培养中的污染情况。

主权项

1.一种适用于甜菊花药培养的花药分离方法，其特征在于步骤如下：(1)花序采集：于甜菊盛花期从植株上采集苞片紧闭、花蕾长1.8‑2.2毫米的头状花序，置于铺有湿润滤纸的培养皿中，4℃冰箱中保存备用；(2)花序消毒：在超净工作台中，先将头状花序用75％乙醇消毒30秒，1％升汞浸泡3‑4分钟，再用无菌水清洗3‑4次，然后将花序置于铺有无菌滤纸的培养皿中晾干，所述培养皿为，在干净培养皿中铺3‑4张滤纸，用报纸包裹，高温高压灭菌备用；(3)花药分离：用无菌小镊子剥开苞片，从花序中拔取一个花蕾，并将其置于75％乙醇消毒的左手食指指腹上，用右手持解剖针刺破花蕾的花冠顶部，再用无菌解剖针针尖段从花冠基部向顶部滚动式挤压，将筒状花药从花冠顶部破口处完整挤出。