[发明专利]植物亚细胞中总可溶性酚的分离提取方法

摘要

本发明提供一种植物亚细胞中总可溶性酚的分离提取方法，取新鲜水稻幼苗样品0.4g‑0.6g在提取液中冰浴研磨成匀浆；将匀浆倒入离心管中，低温离心；将上清液a倒入一新的离心管中，沉淀物a继续低温离心；得到沉淀物b以及上清液b；将上清液a和上清液b混合，得到上清液c，将上清液c在低温离心得到上清液d为细胞液总可溶性酚和沉淀物d；在沉淀物b和沉淀物d中分别加入3mL‑8mL80％甲醇，旋涡混匀；然后再低温离心；在沉淀物e和沉淀物f中分别加入甲醇，低温离心，得到上清液g和上清液h为细胞壁和细胞器提取出的总可溶性酚。该方法能稳定测量植物亚细胞总可溶性酚含量。

主权项

1.一种植物亚细胞中总可溶性酚的分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，取新鲜水稻幼苗样品0.4g‑0.6g在3mL‑8mL的提取液中冰浴研磨成匀浆；提取液包括：0.25mM蔗糖、50mM Tris‑HCl以及1mM二硫苏糖醇；所述提取液pH为7.5；步骤2，将步骤1得到的匀浆倒入离心管中，在600r/min的条件下，4℃低温离心1min；将上清液a倒入一新的离心管中，沉淀物a在10000r/min的条件下，4℃低温离心10min；得到沉淀物b为细胞壁组分，上清液b留作备用；步骤3，将上清液a和上清液b混合，得到上清液c，将上清液c在10000r/min的条件下，4℃低温离心30min，得到上清液d和沉淀物d；其中，上清液d为细胞液中的总可溶性酚，沉淀物d为细胞器组分；步骤4，在沉淀物b和沉淀物d中分别加入5mL80％甲醇，在2000r/min‑3000r/min的条件下，旋涡1min‑2min，混匀；然后再在10000r/min的条件下，4℃低温离心5min，倒掉上清液分别得到沉淀物e和沉淀物f；步骤5，在沉淀物e和沉淀物f中分别加入3mL‑8mL80％甲醇，在2000r/min‑3000r/min的条件下，旋涡1min‑2min，混匀；然后在40KHZ的条件下，25℃超声处理25min‑40min，再在100rmp‑200rmp的条件下震荡10min‑15min，最后在10000r/min的条件下，4℃低温离心15min，分别得到上清液g和上清液h，所述上清液g为细胞壁中的总可溶性酚，所述上清液h为细胞器中的总可溶性酚。