[发明专利]一种富含多糖类微生物基因组DNA的提取方法

摘要

本发明公开的一种富含多糖类的微生物基因DNA的提取方法，包括如下步骤1)取适量菌体，加入核酸分离缓冲液和2‑巯基乙醇，置水浴中混匀；2)取出离心，吸出上清；3)加入PBS溶液，震荡离心，吸弃上清；重复1次；4)加入PBS溶液，用手震荡混匀，吸弃上清并重复1次；5)洗净上清后，加入STES震荡混匀，加入酚氯仿震荡离心；6)移上清至新的离心管中，加入RNaseA混匀后，室温放置；7)加入磁珠和binding buffer，震荡混匀；8)血液混匀仪上结合；9)置于磁力架上，待上清澄清后，吸弃上清；10)加入乙醇，静置后去除乙醇；11)短暂离心后，洗净乙醇，加入灭菌水吹打混匀；12)室温放置待上清澄清后，移上清到新的离心管中。

主权项

一种富含多糖类的微生物基因DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取适量菌体，加入1.5ml核酸分离缓冲液和20ul 2‑巯基乙醇，震荡混匀，置90℃水浴中10min，期间颠倒混匀几次；2)取出，离心机中6000r/min离心10min，此时可看到大量多糖存在于溶液中；3)用移液器轻轻吸出上清，注意不要吸到多糖；4)加入1ml 1x PBS溶液，研磨仪上60Hz，震荡2s，10000rpm离心2min，用枪轻柔吸弃上清；5)重复4)步骤1次；6)加入1ml 1x PBS溶液，用手震荡混匀，10000rpm离心2min，用枪轻柔吸弃上清；7)重复步骤6)1次；8)洗净上清后，加入500ul STES，震荡混匀，加入500ul酚氯仿，震荡30s；9)12000rpm/min，离心5min；10)小心转移上清至新的离心管中，加入5ul RNaseA，上下颠倒混匀后，室温放置5min；11)加入50ul磁珠，500ul binding buffer，震荡混匀；12)血液混匀仪上结合5min；13)置于磁力架上，待上清澄清后，吸弃上清；14)加入1ml 80％乙醇，静置30s后，去除乙醇；15)短暂离心后，洗净乙醇，加入适量灭菌水，吹打混匀；16)室温放置2min，放置在磁力架上，待上清澄清后，转移上清到新的离心管中。