[发明专利]一种氟嘧菌酯半抗原的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种氟嘧菌酯半抗原的制备方法及其应用，该制备方法以氟嘧菌酯工艺合成路线中的关键中间体3‑[1‑(2‑羟基苯基)‑1‑(甲氧亚氨基)‑甲基]‑5,6‑二氢‑1,4,2‑二噁嗪为原料，先与4,5,6‑三氟嘧啶发生醚化反应，再与邻羟基苯乙酸甲酯反应得到氟嘧菌酯半抗原，合成的方法简单，产物纯度和产率高；采用碳二亚胺法将半抗原直接与牛血清蛋白偶联后免疫小鼠，产生针对氟嘧菌酯的特异性抗体；制备的检测氟嘧菌酯的试剂盒可用于直接竞争酶联免疫分析中，满足国内对氟嘧菌酯残留的检测需要。本发明提供的氟嘧菌酯半抗原为建立快速、简便、价廉、灵敏、特异的氟嘧菌酯的检测方法提供了新的物质基础。

主权项

一种氟嘧菌酯半抗原的制备方法，其特征在于：以3‑[1‑(2‑羟基苯基)‑1‑(甲氧亚氨基)‑甲基]‑5,6‑二氢‑1,4,2‑二噁嗪为原料，先与4,5,6‑三氟嘧啶发生醚化反应，再与邻羟基苯乙酸甲酯反应得到氟嘧菌酯半抗原；所述氟嘧菌酯半抗原的制备方法包括以下步骤:(1)在0℃下，将等摩尔比的3‑[1‑(2‑羟基苯基)‑1‑(甲氧亚氨基)‑甲基]‑5,6‑二氢‑1,4,2‑二噁嗪和4,5,6‑三氟嘧啶溶于1L四氢呋喃中，再加入7.0g 80％的氢化钠植物油悬浮液得到混合液，在0℃下磁力搅拌反应3h，转速为1500‑2000r/min，随后不再进行冷却，继续搅拌12‑14小时，反应液用乙酸乙酯消化并用水反复洗涤，有机相用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到黏稠油状物，待该油状物形成结晶，得到3‑{1‑[2‑(4,5‑二氟嘧啶‑6‑基氧基)‑苯基]‑1‑(甲氧亚氨基)‑甲基}‑5,6‑二氢‑1,4,2‑二噁嗪；(2)将步骤(1)制备的3‑{1‑[2‑(4,5‑二氟嘧啶‑6‑基氧基)‑苯基]‑1‑(甲氧亚氨基)‑甲基}‑5,6‑二氢‑1,4,2‑二噁嗪和等摩尔比的邻羟基苯乙酸甲酯溶于1L二甲基甲酰胺中，再加入32g碳酸钾和2.2g氯化亚铜，将该混合液加热到100℃反应12‑14小时；(3)将步骤(2)的反应结束后得到的混合液恢复到室温，再加入10‑30％浓度的盐酸，加热5‑10h，静置并冷却到室温，过滤，滤饼用去离子水漂洗，烘干后得到氟嘧菌酯半抗原。