[发明专利]利用植株幼苗进行遗传转化的方法

摘要

本发明公开了一种利用植株幼苗进行遗传转化的方法，包括：将幼苗植株于上胚轴处切断，保留幼苗植株上胚轴至根部部分作为遗传转化材料，其中，该幼苗植株的茎粗达到1mm或以上。本发明操作过程简单；使用的培养基简单、节约资源；获得阳性转化子的工作周期短；获得的阳性转化子易于保存。

主权项

1.一种利用植株幼苗进行遗传转化的方法，其特征在于，包括：将幼苗植株于上胚轴处切断，保留幼苗植株上胚轴至根部部分作为遗传转化材料，其中，该幼苗植株的茎粗达到1mm或以上，植株上胚轴切断处距根基部约2 cm；/n获得所述遗传转化材料后，还包括如下步骤：/n利用农杆菌介导的遗传转化方法，将所述遗传转化材料的上胚轴伤口处浸于农杆菌转化液中浸染5~15 min，将目的基因转化入所述遗传转化材料中，之后将所述遗传转化材料根部插入MS固体培养基中光照培养18~30天得到完整植株，在所述农杆菌介导的遗传转化方法中，在将所述遗传转化材料的上胚轴伤口处浸于农杆菌溶液中浸染5~15 min之后，还包括利用脱脂棉吸干所述遗传转化材料上的溶液，之后于无菌条件下2~4℃放置20~30min，再然后将所述遗传转化材料和所述脱脂棉共同插入MS固体培养基中暗培养3~7天，最后再将所述MS固体培养基中光照培养18~30天得到所述完整植株；其中，所述农杆菌转化液中农杆菌浓度OD₆₀₀＝0.8，且农杆菌细胞中含有所述目的基因或所述目的基因的表达载体；/n获得所述完整植株后，还包括如下步骤：/n通过剪取再生芽的部分叶片，利用筛选标记GUS进一步确定阳性转化子，得到转化有所述目的基因的阳性转化子；/n获得所述幼苗植株的方法包括：取植物种子，将所述植物种子播种于MS固体培养基上暗培养15~25天，之后再光照培养8~12天，所述植物种子为橘类、橙类、柚类、柠檬、石榴或梨中的任意一种。/n