[发明专利]兔抗人ERK8多克隆抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种兔抗人ERK8多克隆抗体的制备方法。本发明将ERK8蛋白第446‑473位的28个氨基酸作为ERK8多克隆抗体表位。在大肠杆菌中诱导表达GST融合蛋白，用Glutathione Sepharose 4B beads纯化GST融合蛋白。用纯化后的抗原免疫新西兰白兔，收集兔子血液制备抗血清，从血清中分离纯化得到兔抗人ERK8多克隆抗体。本发明制备的抗体具有生产成本低，特异性好，效价高的特点。可与细胞外源性及内源性ERK8蛋白特异性结合反应，能够满足免疫印迹、免疫荧光等实验需求，用于建立体外免疫分析和ERK8蛋白功能研究。

主权项

兔抗人ERK8多克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)：经Immuneepitop工具分析，将ERK8蛋白N端第446‑473位的28个氨基酸作为兔抗人ERK8多克隆抗体表位，其碱基序列如SEQID NO：1所示，其氨基酸序列如ID NO：2所示；(2)：构建pGEX‑5X‑1‑GST‑ERK8(28aa)质粒，在大肠杆菌BL21细胞中诱导表达GST‑ERK8(28aa)蛋白，用Glutathione Sepharose 4Bbeads纯化蛋白；(3)：将纯化后的蛋白通过浓缩，脱盐和乳化，乳化后在兔背部皮下多点注射，先后注射3次，每次间隔10～14天；(4)：最后采用耳静脉注射1次，注射7～10天后，收集、分离得到含有兔抗人EKK8多克隆抗体的血清；(5)：将Glutathione Sepharose 4B beads与GST蛋白溶液孵育，使GST蛋白结合到琼脂糖珠上，生成GST‑GSH beads，后将GST‑GSH琼脂糖珠与血清孵育，使抗GST的抗体与抗ERK8的抗体分离，得到兔抗人ERK8多克隆抗体。