[发明专利]一种人抗CD19嵌合抗原受体修饰的CIK的制备方法及应用有效
| 申请号： | 201610933594.0 | 申请日： | 2016-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN106544365B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 刘明录;万磊;李言志;冯健海;金海峰;强邦明;张传鹏 | 申请（专利权）人： | 山东兴瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 37105 济南诚智商标专利事务所有限公司 | 代理人： | 杨筠<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 261500 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人抗CD19嵌合抗原受体修饰的CIK的制备方法及应用，编码嵌合抗原受体scFv(CD19)‑CD8‑(4‑1BB)‑CD3ζ的融合基因片段，将所述融合基因片段插入慢病毒表达载体，包装成携带scFv(CD19)‑CD8‑(4‑1BB)‑CD3ζ编码基因的慢病毒，将所述携带scFv(CD19)‑CD8‑(4‑1BB)‑CD3ζ编码基因的慢病毒感染患者自体淋巴细胞诱导的CIK，该嵌合抗原受体scFv(CD19)‑CD8‑(4‑1BB)‑CD3ζ]修饰的CIK可用于B细胞淋巴瘤白血病的治疗。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 cd19 嵌合 抗原 受体 修饰 cik 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种人抗CD19嵌合抗原受体修饰的CIK的制备方法，其特征在于：将人源化抗人B细胞淋巴瘤抗原CD19的单链抗体、CD8的hinge区和跨膜区、4-1BB和CD3ζ的胞内信号结构域的核苷酸序列依次连接起来，得到编码嵌合抗原受体scFv(CD19)-CD8-(4-1BB)-CD3ζ的融合基因片段，将所述融合基因片段插入慢病毒表达载体，包装成携带scFv(CD19)-CD8-(4-1BB)-CD3ζ编码基因的慢病毒，将所述携带scFv(CD19)-CD8-(4-1BB)-CD3ζ编码基因的慢病毒感染患者自体淋巴细胞诱导的CIK，得到嵌合抗原受体scFv(CD19)-CD8-(4-1BB)-CD3ζ修饰的CIK；其中，所述的编码嵌合抗原受体scFv(CD19)-CD8-(4-1BB)-CD3ζ的融合基因片段为序列表SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列；所述患者自体淋巴细胞诱导的CIK如下制取：取患者自体外周血，分离外周血单个核细胞，用含有重组干扰素的培养基诱导培养24小时后，加入重组白细胞介素、OKT-3和5％的患者自体血浆诱导继续培养24小时；每隔三天倍比加液，培养至第14天，流式细胞术检测CIK细胞的分子标记CD3+、CD56+的阳性表达率；当CD3+阳性率>80％，CD3+CD56+双阳性率>20％，视为CIK诱导成功，收获患者自体淋巴细胞诱导的CIK；所述编码嵌合抗原受体scFv(CD19)-CD8-(4-1BB)-CD3ζ的融合基因片段如下制取：通过基因合成技术将编码CD8的hinge区和跨膜区及4-1BB和CD3ζ的胞内信号结构域的核苷酸序列构成融合片段CD8-(4-1BB)-CD3ζ，然后通过重叠延伸PCR将[scFv(CD19)]和融合片段CD8-(4-1BB)-CD3ζ拼接成所述编码嵌合抗原受体scFv(CD19)-CD8-(4-1BB)-CD3ζ的基因片段。/n
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