[发明专利]快速提取哈蟆油基因组DNA的方法、试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种快速提取哈蟆油基因组DNA的方法，包括1)取哈蟆油样品，加入Chelex‑100和蛋白酶K，先水浴保温，后高温终止，进行细胞裂解，离心后获得第一上清液；其中，Chelex‑100用于螯合所述哈蟆油样品中的非核酸有机物和使蛋白变性便于蛋白酶K进行酶解，蛋白酶K用于消化所述哈蟆油样品中的蛋白质；2)在所述第一上清液中加入酚/氯仿/异戊醇，去除残留的脂类和蛋白质；3)利用异丙醇或无水乙醇沉淀DNA。还提供了快速提取哈蟆油基因组DNA的试剂盒，以及在使用DNA条形码技术鉴定哈蟆油中的应用。本发明的提取方法能实现对干燥哈蟆油药材中基因组DNA的快速有效抽提，为DNA条形码技术得到更为广泛的应用提供基础。

主权项

1.一种快速提取哈蟆油基因组DNA的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)取哈蟆油样品5mg，加入Chelex‑100和蛋白酶K，先水浴保温，后高温终止，进行细胞裂解，离心后获得第一上清液；其中，Chelex‑100用于螯合所述哈蟆油样品中的非核酸有机物和使蛋白变性便于蛋白酶K进行酶解，蛋白酶K用于消化所述哈蟆油样品中的蛋白质；在加入Chelex‑100和蛋白酶K之后，使用研磨杵对所述哈蟆油样品进行研磨粉碎；所述水浴保温为54℃～58℃保温25～35分钟；所述高温终止为在煮沸的条件下保温5～10分钟，以使细胞膜破裂，并阻止所述哈蟆油样品的膨胀吸水；2)以14000rpm/min的转速离心3min，取上清得所述第一上清液，所述第一上清液加水补足体积至650～750μl，然后加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，并剧烈振荡，离心后获得第二上清液；其中所述酚/氯仿/异戊醇的体积比为酚：氯仿：异戊醇＝25:24:1，去除残留的脂类和蛋白质；在所述第二上清液中，加入等体积氯仿/异戊醇，并剧烈振荡，离心后获得第三上清液；其中所述氯仿/异戊醇的体积比为氯仿：异戊醇＝24:1；3)利用异丙醇或无水乙醇沉淀DNA。