[发明专利]一种倒刺鲃微卫星家系鉴定方法

摘要

本发明公开了一种倒刺鲃微卫星家系鉴定方法，该方法包括以下步骤将来自自然群体的倒刺鲃亲本进行人工繁育，得到2个家系，提取基因组DNA；设计并合成一系列微卫星引物序列，并对基因组DNA进行PCR扩增，筛选出9对扩增稳定、多态性高、杂合度高的引物；将引物组合成3个多重PCR体系，分别对基因组DNA进行PCR扩增，得到多重PCR产物；对多重PCR产物进行分析，确定待测个体与哪个亲本具有亲子关系。本发明方法的建立为倒刺鲃的家系鉴定、种质管理和增殖放流效果评估提供了一种新的技术手段。

主权项

一种倒刺鲃微卫星家系鉴定方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将来自自然群体的倒刺鲃亲本进行人工繁育，得到2个家系，待鱼苗孵化出三个月后分别取30尾以上的鱼苗作为亲子鉴定的家系群体；(2)随机选取步骤(1)中亲本和子代群体的鱼苗，以它们的鳍条组织提取基因组DNA；(3)设计并合成一系列的倒刺鲃微卫星引物序列，并对步骤(2)的基因组DNA进行PCR扩增，筛选出扩增稳定、多态性高、杂合度高的引物；共筛选出以下9对倒刺鲃微卫星引物：SPMi1、SPMi7、SPMi15、SPMi18、SPMi23、SPMi24、SPMi31、SPMi33、SPMi36；SPMi1的序列分别如SEQ.ID.NO.1和SEQ.ID.NO.2所示；SPMi7的序列分别如SEQ.ID.NO.7和SEQ.ID.NO.8所示；SPMi15的序列分别如SEQ.ID.NO.13和SEQ.ID.NO.14所示；SPMi18的序列分别如SEQ.ID.NO.9和SEQ.ID.NO.10所示；SPMi23的序列分别如SEQ.ID.NO.3和SEQ.ID.NO.4所示；SPMi24的序列分别如SEQ.ID.NO.11和SEQ.ID.NO.12所示；SPMi31的序列分别如SEQ.ID.NO.15和SEQ.ID.NO.16所示；SPMi33的序列分别如SEQ.ID.NO.17和SEQ.ID.NO.18所示；SPMi36的序列分别如SEQ.ID.NO.5和SEQ.ID.NO.6所示；(4)将步骤(3)筛得的9对倒刺鲃微卫星引物组合成3个多重PCR体系，多重PCR体系1包括SPMi1、SPMi23、SPMi36；多重PCR体系2包括SPMi7、SPMi18、SPMi24；多重PCR体系3包括SPMi15、SPMi31、SPMi33，其中每一对引物的正向引物的5’端标记上荧光标记；然后用3个多重PCR体系分别对步骤(2)的基因组DNA进行PCR扩增，得到多重PCR产物；(5)将3组多重PCR产物在ABI3730xl分析仪上进行基因分型，读取个体等位基因大小，并对数据进行分析，根据待测个体与亲本基因型之间的相关性，确定待测个体与哪个亲本具有亲子关系。